Сверхэкспрессия и очистка токсичной нуклеазы из кишечной палочки

Наша лаборатория нацелена на структурную и биохимическую характеристику консервативной эндонуклеазы, обнаруженной в нидовирусах, включая коронавирусы, чтобы разработать эволюционную модель и обеспечить основу для терапевтических мишеней. Нуклеазы могут быть трудно экспрессировать в системах E. coli из-за ферментативной активности на клеточной ДНК или РНК, что может привести к медленному росту и плохому выходу белка. Наше открытие позволит нам очистить токсичные нуклеазы от других нидовирусов для дальнейших биохимических и структурных исследований.

Для начала используйте одну стерилизованную колбу Эрленмейера объемом 50 миллилитров на каждый литр культуры и приготовьте две-три дополнительные колбы в качестве закваски. Пометьте одну из колб звездочкой, чтобы обозначить ее для проверки оптической плотности, так как ее измерения будут представлять весь рост, если между колбами нет визуальной разницы. С помощью градуированного цилиндра приготовьте мастер-смесь, соединив 60 миллилитров среды 2Х TY и 60 микролитров стокового раствора ампициллина, размороженного при температуре минус 20 градусов Цельсия.