Мышиная мезентериальная лимфаденэктомия для селективного нарушения лимфатической коммуникации с регионально-специфическим кишечником

Наши исследования сосредоточены на ответах Т-клеток на неоантигены и периферические ткани, и эти реакции сильно зависят от прайминга, поэтому мы в первую очередь сосредотачиваемся на местах происходящего этого процесса. В настоящее время единственными широко используемыми способами блокировки движения между лимфатическими узлами и тканями являются системные методы, такие как агонисты рецепторов S1P и интегрин-блокада. Но это широкое торможение мешает нам изучать вклад конкретных локальных лимфатических узлов.

Наш протокол содержит подробное описание высокоселективных лимфаденэктомий на каждой из четырёх основных станций мезентериальных лимфатических узлов, и поскольку эти лимфатические узлы довольно специализированы в сегменте кишечника, который они дренируют, эта хорошо переносимая процедура выживания позволяет нам нарушать определённые сегменты лимфатической оси кишечника, оставляя остальные нетронутыми. После подтверждения подходящей глубины анестезии с помощью защитного прижима задней стопы используйте стерильные хирургические ножницы для нанесения разреза кожи на средней линии 0,5–1 сантиметра у анестезиированной мыши. С помощью стерильных щипцов вскрыть кожу от брюшной стенки и определить linea alba.

Затем сделайте ещё один разрез на 0,5–1 сантиметр через linea alba, чтобы попасть в брюшинную полость. С помощью иголки с тупым кончиком введите в брюшинную полость один миллилитр стерильного физиологического раствора при температуре тела. Увлажните стерильные шторы, чтобы подготовить их к позиционированию кишечника.

Для удаления первой станции лимфатического узла ориентируйте наружное кишечник на увлажнённые шторы, при этом сверху сверху расположен сверху грудную кишку, проксимальную кишку — сверху, а терминальную подвздошную часть — к хирургу. Определите цепочку мезентериального лимфатического узла, которая проходит вдоль толстой кишки. Используя наклонные щипцы с тонкими концами, грубо разрезайте первую станцию лимфатического узла от илеоколических сосудов, разместив закрытые щипцы между этими структурами и аккуратно открывая их.

Чтобы снизить теоретический риск сопутствующего течения в близлежащие узлы, выполните опциональное перевязывание швами с одиночными прерванными швами вдоль цепи лимфатического узла, на один миллиметр дистально и один миллиметр проксимально от первой станции лимфатического узла, используя монофиламентный нейлоновый шов и тонко наконечные щипцы. Аккуратно втяните лимфатический узел в каудальную, затем с помощью тонких ножниц вырезать целевую лимфатическую станцию от головного узла к каудальному. Осмотрите дистальные ветви илеоколических сосудов, подвздошных сосудов и еюнальных сосудов, чтобы убедиться, что кровоснабжение осталось нетронутым.

Для удаления второго лимфатического узла аккуратно выпотрошите тонкий кишечник и ориентируйте наружное кишечник на увлажнённые шторы, при этом слепая кишка располагается снизу, проксимальная кишка сверху, а тонкий кишечник — справа от хирурга. Далее определите вторую станцию лимфатического узла, которая проходит вдоль толстой кишки и начинается в месте слияния подвздошных и севных сосудов. С помощью наклонных тонкоконечных щипцов грубо вскрыть вторую станцию лимфатического узла от сосудов толстой кишки.

Чтобы снизить теоретический риск сопутствующего течения в близлежащие узлы, выполните необязательную швовую лигировку с одиночными прерванными швами вдоль цепи лимфатического узла, на один миллиметр дистально и один миллиметр проксимально от второй станции лимфатического узла, используя монофиламентный нейлоновый шов и тонко наконечные щипцы. Аккуратно втяните лимфатический узел в хвостовую сторону, затем с помощью тонких ножниц вырезать вторую лимфатическую станцию от головного узла в каудальное направление. Осмотреть оперативное поле, чтобы убедиться в гемостазе.

Для удаления четвёртого лимфатического узла аккуратно выпотрошите весь тонкий кишечник до задней точки привязки. Ориентируйте кишечник на увлажнённые шторы, при этом сверху сверху — сверху, проксимальный кишечник — справа от хирурга. Определите четвёртую станцию лимфатического узла, которая находится чуть медиально от дистальной толстой кишки и латерально от третьей стороны.

Используя наклонные тонкие щипцы или сверхтонкие ножницы, грубо вскрыть четвёртую лимфатическую станцию от сосудов толстой кишки и окружающих жировых тканей. Чтобы снизить теоретический риск сопутствующего течения в близлежащие узлы, выполните необязательное перевязывание швами с одинарными прерванными швами на каждом идентифицируемом лимфатическом узле, обычно в одном миллиметре от узла, с использованием монофиламентного нейлонового шва и тонко наконечных щипцов. Затем аккуратно втяните четвёртый лимфоузел — цефалад.

С помощью тонких или сверхтонких ножниц вырезать лимфатические узлы от хвостового до головного мозга. Повторите процедуру для второго узла в четвёртой лимфатической станции. Тщательно вскрыть узел, при необходимости выполнить швовую перевязку и резецировать его.

Осмотрите операционное поле для подтверждения гемостаза. После возвращения брюшного содержимого в брюшную полость введите в брюшную полость один миллилитр стерильного физиологического раствора при температуре тела для компенсации потери испарительной жидкости. Закройте брюшную полость в два слоя: сначала брюшную стенку, затем кожу с помощью монофиламентного полипропиленового шва 6-0 по бегущей схеме.

Ткани, извлеченные с помощью мезентериальной лимфаденэктомии, стабильно приводили к получению образцов с низким содержанием жира, что подтверждается немедленным погружением в PBS. Анализ потоковой цитометрии подтвердил успешное удаление лимфатических узлов: более 95% клеток в образцах, полученных с помощью мезентериальной лимфаденэктомии, были выявлены как положительные CD45, по сравнению с только 7% в контроле висцеральной жировой ткани.