Ультразвуковая допплерография для визуализации в реальном времени и количественной оценки сосудистой функции яичников у мышей

Цель этого исследования — охарактеризовать кровоток в моче в предовуляторных яичниках с помощью неинвазивного метода in vivo. В этой области отсутствуют неинвазивные методы для изучения ремоделирования сосудистых сосудов яичников в реальном времени без нарушения нормальной физиологии у мышей. Для начала включите основное питание, расположенное на задней панели системы визуализации.

После загрузки системы переключите выключатель ожидания компьютера слева от картриджа, чтобы разбудить монитор и компьютер. Подключите преобразователь MS700 к активному порту на устройстве изображения, расположенном в самом правом порте. Выровняйте фиксирующий штифт на разъёме преобразователя с выемкой в порте.

Полностью введите разъём и поверните рычаг фиксации в вертикальное положение, чтобы закрепить его. Запустите программу для анализа, нажав на значок программного обеспечения. Нажмите «Новое», чтобы создать новое исследование, и выберите соответствующее название из выпадающего меню.

В окне информации об исследовании введите название исследования, название серии. Пакет для применения — яичник, а измерительный пакет — сосудистый. После открытия программы и автоматического обнаружения преобразователя выберите пакет приложения для яичников.

Далее нанесите небольшое количество крема с электродом на каждый из электродов, чтобы обеспечить правильный контакт и мониторинг сердечного ритма. После полной седации животное перенаправите поток газа, открыв кран к носовому конусу на платформе для визуализации и закрыв кран в камеру впуска. Аккуратно перенесите мышь на нагреваемую платформу для съёмок.

Положите мышь в положение лежа так, чтобы спинная сторона была обращена вверх, и закрепите носовой конус над носом для поддержания анестезии. Прикрепите каждую ногу крема для электрода на соответствующую электродную площадку для физиологического контроля. Наносите глазную мазь на глаза, чтобы предотвратить пересыхание роговицы во время анестезии.

Подтвердите достаточную глубину анестезии с помощью рефлекса сжатия пальца ног. Следите за жизненными показателями животного, такими как частота дыхания и сердцебиение, движения, указывающие на дискомфорт, и температуру платформы каждые пять минут. Далее побрить нижний правый квадрант спины с помощью электробритвы от правой задней конечности до средней линии, оставаясь латерально от позвоночника.

Нанесите тонкий слой крема для удаления волос. Через минуту тщательно протрите крем влажной марлей. Затем нанесите щедрый и равномерный слой ультразвукового геля на выбритую область.

Разместите датчик-датчик в поперечном режиме относительно мыши на механической подставке с вырезом ориентации, направленной влево от оператора. Закрепите датчик на месте с помощью зажима. Нажмите кнопку B-Mode на панели управления, чтобы активировать стандартное окно в оттенках серого.

Убедитесь, что мышь и платформа плоские, а преобразователь перпендикулярен поверхности. Затем потяните кожу влево и расположите преобразователь ближе к верхней выбритой области, ближе к средней линии спины. Аккуратно опустите преобразователь на выбритое место, покрытое ультразвуковым гелем.

Выровняйте левый край зонда с позвоночником, а правый — по правому флангу. Чтобы определить яичник, сначала определите почку — большую светло-серую яйцевидную структуру с корой и продолговатым мозгом. Слегка сдвините платформу визуализации к голове мыши, чтобы обнаружить яичник и периовариальную жировую ткань.

Нажмите кнопку Cine Store, чтобы снять видео B-Mode. Теперь нажмите клавишу Power Doppler Mode на панели управления, чтобы визуализировать сосуды с высокой чувствительностью к низкоскоростному потоку. Отрегулировать доплеровское усиление до 32–55 децибел, чувствительность до 5, динамический диапазон до 15 DR и скорость до одного килогерца.

Плавно двигайте платформу взад-вперёд, чтобы получить лучший обзор сосудистых сосудов и определите артерию яичника, входящую в яичник, медуллярные сосуды в центральной медулле и кортикальные сосуды вокруг развивающихся фолликулов. Нажмите Cine Store, чтобы сохранить отображаемое видео яичника и сосудистых органов в режиме Power Doppler. Чтобы отличить артериальный от венозного потока, нажмите Color Doppler Mode.

Красный показывает поток к преобразователю, а синий — уход от него. Сосуд с более высокой средней скоростью — это яичниковая артерия. Нажмите кнопку Pulsed Wave PW Doppler, чтобы вызвать образцы дат.

Нажмите ещё раз, чтобы активировать доплеровскую спектральную форму волны. После размещения затвора образца в центре люмена сосуда отрегулируйте угол инсонации ниже или равным 60 градусам и параллельно потоку с помощью ручки угла. Для яичниковой артерии разместите ворота прямо перед входом в яичник.

Для мозгового сосуда разместите его в центральной бифуркации. Для кортикальных сосудов размещайте его у основания растущего фолликула. Нажмите Cine Store, чтобы сохранить как ультразвуковое изображение, так и форму спектральной волны.

После завершения съёмки стирайте ультразвуковой гель с задней панели и аккуратно уберите мышь с платформы. И положите мышь на грелку, пока полностью не проснётся. Мощная доплеровская визуализация показала заметное увеличение профузии в медуллярных сосудах при инъекции хорионического гонадотропина через час после инъекции хорана в человеческом составе, затем возвращение к исходному состоянию через восемь часов и дальнейшее снижение на 12 часов после инъекции.

Цветная доплеровская визуализация позволила чётко различать артерию яичника и вену яичника и улучшить визуализацию направления течения в сосудах яичников. Репрезентативные допплеровские формы PW демонстрировали чёткие циклы с измеряемыми пиковыми систолическими и конечными диастолическими скоростями в яичниковой артерии у гормонально отзывчивой мыши, тогда как у мыши, не реагирующая мышь, сигнал был низким, без обнаруживаемой формы волны. Через час после инъекции хорионного гонадотропина скорость кровотока увеличилась в яичниковой артерии, медулярных сосудах и корковых сосудах у мышей, реагировавших на стимуляцию, но у нереагирующей мыши такого увеличения не наблюдалось.

У неотзывчивых мышей скорость в корковых сосудах опускалась ниже порога обнаружения в выбранные временные точки, указанные заполненными значениями. С помощью доплеровской ультразвуковой работы мы определили, что скорость кровотока в яичниках быстро увеличивается после всплеска DLH у мышей. Доплеровское ультразвуковое исследование позволяет многократное, неинвазивное оценивание гемодинамики яичников в предовуляторном периоде, чего другие методы не могут реализовать.

После характеристики нормальной преовуляционной гемодинамики будущие исследования смогут использовать этот протокол для изучения нарушений кровотока в моделях яичников, таких как СПКЯ.