Тестирование физиологические барьеры на пути передачи вируса в Тли Использование Микроинъекция

Если это эффективные трансмиттеры растительных вирусов, если это микроинъекции вируса, то процедура, которую мы покажем вам сегодня, является методом, позволяющим исследователям вводить вирус непосредственно в гемоклеточную клетку мерцательной аритмии, минуя кишечник, один из двух основных барьеров для передачи вируса циркулятивным путем. Здравствуйте, я Сесилия Тамрин Дехи, постдок на кафедре патологии растений в Корнельском университете. Сегодня я покажу вам, как ввести вирус в вирус гемоклеток AFI, который затем может передаваться различным видам растений.

Например, это растение FE заражено вирусом листьев картофеля PLRV. Вы можете увидеть разницу между здоровым и зараженным растением. Наиболее заметным симптомом является склероз Тавена.

PLRV — это вирус лютье, который APHIS переносит в гемолимфе, эквиваленте крови млекопитающих насекомых. Когда неинфицированный AFI питается зараженным растением, он заражается вирусом через растительный грипп, который вы можете увидеть здесь. После попадания в организм вирус должен пройти из кишечника насекомого в гемолимфу, а затем через слюнную железу, чтобы быть переданным обратно растению ESE.

И если при питании растением ЭСЭ может потребоваться много вирусов, то только по мере того, как большая часть будет проходить через кишечник и слюнную железу. Два основных барьера для передачи инфекции могут заразить больше растений для тестирования. Если AFI выведен из строя для переносчика вируса, мы кормим его зараженной тканью в течение двух дней, а затем даем ему питаться в здоровом растении в течение пяти дней.

Затем растение фумигируют, и через три недели мы начинаем поиск симптомов. Когда мы находим мерцательную аритмию, которая не может быть вектором вируса, мы можем оценить, какой из двух барьеров останавливает вирус с помощью процедуры микроинъекции, которую я вам сегодня покажу. При этой процедуре вирус вводится непосредственно в гемоклетку, минуя кишечный трансмиссионный барьер.

Итак, давайте начнем, и я покажу вам, как сделать микроинъекцию апекса. Итак, это стекло, стеклянные иглы, которые мы используем. Вытягиваем вниз стеклянные иглы от этого стеклянного щита с помощью всу всу.

Итак, это микроинжектор. Сделать микроинъекцию вируса. Я собираюсь начать вставлять иглу в иглодержатель.

Так что я просто вставляю иглу и ставлю ее на место. Итак, теперь я собираюсь загрузить вирус в иглу на вершину этого штурвала. Теперь нам нужно расположить AFI для микровпрыска.

Итак, я собираюсь взять AFI с болевым давлением и поместить его в держатель AFI. В идеале, я попытаюсь расположить заднюю часть тли напротив держателя, чтобы у меня был доступ к брюшной части мерцательной аритмии. Ладно, отлично.

Теперь мы можем пойти дальше и сделать микроинъекцию. Хорошо, теперь я расположу иглу и приблизлю ее к мерцательной аритмии. Итак, теперь я собираюсь привести иглу в контакт с мерцательной аритмией, и чтобы проколоть экзоскелет, лучше всего попытаться проколоть промежуточный сегмент у основания ног.

Так что я собираюсь сделать инъекцию. Теперь я беру AFI с помощью кисти и помещаю его в восстановительную бумагу, где я собираюсь позволить ему записать на мгновение. Поэтому нам также необходимо контролировать микроинжекцию afi.

Эта контрольная микроинъекция производится только с буфером без вируса. Буфер, который мы используем, на 0,1 фосфата больше pH 7. Итак, я собираюсь поместить A fit в здоровое растение, где я собираюсь позволить ему приспособиться в течение пяти дней после того, как я собираюсь судьба растения, и ждать развития симптомов после микроинъекции нижней нити NA в течение недели каждый день, уровень экспрессии целевого гена измеряется в afi.

Таким образом, мы только что внедрили микровирус, который не смог передать вирус. Если после микроинъекции AFI способен передавать вирус, это будет означать, что у этого AFI есть кишечный барьер, который блокировал вирус. Если же симптомы не развиваются, это будет означать, что у данного афита сильный барьер слюнных желез.

Итак, мы только что показали, как впрыскивать вирус в тлю. Эта же процедура используется для микроинъекции этих ничейных РНК в тлю для выполнения RNI-интерференции глаз, что является интересным методом для изучения функции генов у тли. Вот и все о микроинъекции.

Надеюсь, вам понравится и это будет полезно для ваших экспериментов. Спасибо.