Микроваскулярная перфузия, контролируемая лазерной спекл-контрастной визуализацией при ишемии-реперфузии почек у мышей

В этом исследовании мы используем лазерные системы спекл-контрастной визуализации для мониторинга микроперфузий в гиней во время реперфузии ишемии. Эта технология может применяться в исследованиях, связанных с изменениями кровотока, например, трансплантации твёрдых органов, эффективности лекарств и исследованиях ишемии. Для начала дезинфекции операционного стола перед каждой процедурой.

Аккуратно разложите стерилизованные инструменты, ватные палочки, марлю, предварительно разбавленные анестетики и все остальные необходимые предметы на столе. Вводите мелоксикам в дозе 0,2 миллиграмма на килограмм массы тела подкожной инъекцией за 30 минут до операции для облегчения боли. Налейте стерилизованный физиологический раствор в чистый контейнер.

С помощью ножниц вырежьте подходящее отверстие в центре куска марли. Положите анестезированную мышь на грелку и закрепите её скотчем. Нанесите депиляционный крем для удаления волос на животе.

Используя грелку, поддерживайте температуру ректальной кишки на уровне 37 градусов Цельсия во время операции. Ватной палочкой сначала продезинфекцируйте область операции 75% спиртом, затем йодофором и повторите процедуру ещё два раза. Затем щипцем мышиного пальца ноги для подтверждения отсутствия болевой реакции.

С помощью ножниц сделайте вертикальный средний разрез на животе. Аккуратно отделите кожу от брюшины, а затем разрезите брюшину, чтобы попасть в брюшную полость. Используйте ретрактор для улучшения видимости.

Накройте операционное поле марлей, выровняя отверстие с брюшной полостью. Смочите марлю физиологическим раствором. Ватной палочкой аккуратно сдвините кишечник в одну сторону, чтобы обнажать правую почку и окружающие ткани.

Сложите марлю, чтобы покрыть кишечник, затем смочите его физиологическим раствором, чтобы предотвратить пересыхание. Затем используйте наклонные щипцы, чтобы поднять правый мочеточник. Пропустите две нити 6-0 через мочеточник и перевязывайте в двух позициях.

С помощью микроножниц перерезайте мочеточник между двумя лигатурами. Затем используйте ватные шарики, увлажнённые в физиологическом растворе, с тонкими щипцами, чтобы аккуратно поднять печень вверх. Закрепите печень ватными шариками, чтобы обнажить почки и правые сосуды.

Далее используйте наклонные щипцы, чтобы тупо отделить промежуточные жировые подушечки, пока почечная артерия и вена не будут полностью открыты. Осторожно. Продвините щипцами под почечную артерию и вену, чтобы создать канал. Проведите швом из шёлка 6-0 вокруг обоих сосудов и свяжите их вместе. Перерезать окклюзированную почечную артерию и вену рядом с почкой.

Удалите почку с помощью прилипшей ткани. Затем уберите ватный шарик, которым удерживают печень. Включите лазерную систему контрастного изображения спекл и запустите специальное программное обеспечение.

Нажмите на оригинальное изображение, затем просмотрите предварительный просмотр, чтобы показать необработанное изображение хирургического поля. Переместить мышь. Отрегулируйте увеличение камеры при просмотре исходного изображения, чтобы получить чёткий обзор целевой почки.

Затем нажмите «одновременное отображение», чтобы увидеть изображение кровотока в реальном времени. Установите увеличение на 2,5 раза и выберите автоматическую регулировку кровотока. Затем зафиксируйте параметры кровотока.

Установите запись так, чтобы один кадр снимался каждые 5 000 миллисекунд. Далее установить параметр размера квадратной площади равным 112 и равномерно расположить пять квадратных областей на изображении почек. Нажмите на регистрацию изображения в реальном времени и запись, чтобы начать запись кровотока.

После записи исходного уровня за 30 минут грубо отдельте жировую ткань вокруг левых сосудов почек. С помощью гемостатических щипцов наместите микрозажим через левую почечную артерию и вену возле гилюма. Продолжайте мониторинг в реальном времени ещё 30 минут.

Освободите микрозажим, чтобы инициировать реперфузию. Отслеживайте и фиксируйте восстановление почечного микрососудистого кровотока в реальном времени. После мониторинга реперфузии не менее 60 минут прекратите запись и закройте разрез брюшной полости.

Введите один миллилитр физиологического раствора внутрибрюшинной инъекцией для предотвращения обезвоживания. Положите мышь на грелку и следите, пока она не придёт в себя и не сможет выпрямиться. В течение первых 30 минут почечный микрососудистый кровоток постепенно стабилизировался на исходном уровне.

Гетерогенность уровней перфузии между различными интересующими областями наблюдалась до ишемии. После зажатия почечной артерии и вены кровоток резко снизился, и почечная микроциркуляция вошла в состояние отсутствия перфузии. После снятия зажима кровоток мгновенно поднялся до пика, затем уменьшился, прежде чем постепенно восстановиться до сравнительно стабильного уровня.

Микрососудистая перфузия в течение 60 минут реперфузии была значительно ниже, чем до ишемии. Мы можем получить кровоток почечной микроперфузии с помощью лазерных систем спекл-контрастной визуализации. Тем самым проверяя процесс ишемии и реперфузию.

Чтобы получить прозрачную почку с хорошим контрастом, нужно проявлять терпение и уделять время отделению почки от окружающих ресурсов и тканей. В будущем можно будет включать дополнительные показатели патофизиологии, и эта технология может использоваться для мониторинга влияния лекарств на ишемию почек.