Name: Получение Яйца Xenopus laevis Женщины (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Узнайте метод получения яиц Xenopus laevis у женщин для клеточной биологии и нейронауки. Этот протокол включает индукцию откладки, сбор и сортировку яиц для качественных экспериментов.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Полный текст протокола для этого экспериментальный подход доступен в <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Текущий протоколов в клеточной биологии</a> .

Авторы не заявляют о наличии конфликта интересов.

Получение Яйца xenopus laevis Женщины

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Яйца Xenopus laevis нетронутыми, лизированными, и / или фракционированных полезны для самых разнообразных экспериментов. Этот протокол показывает, как вызвать откладки яиц, сбор и dejelly яйца, и сортировки яиц, чтобы удалить поврежденные яйца.

Получение Яйца Xenopus laevis Женщины

Целые, лизированные и/или фракционированные яйца Xenopus laevis полезны для проведения широкого спектра экспериментов. В данном протоколе показано, как индуцировать откладку икры, ...

Экстракты из яиц Xenopus laevis полезны в качестве источников цитоплазматического и органеллярного материала для реконституции клеточных процессов in vitro, таких как сборка ядра и импорт ядерных белков. Разумеется, прежде чем использовать экстракты из яиц, необходимо получить сами яйца от самок лягушек. Здравствуйте, меня зовут Мари Кросс, я аспирантка в лаборатории доктора Морин Пауэр на кафедре клеточной биологии Университета Эмори в Атланте, штат Джорджия.Сегодня мы покажем вам, как получать и денатурировать икринки взрослых самок *Xenopus laevis*. Данная процедура включает в себя следующие этапы: подготовку лягушек к откладке икры с помощью беременного семафорного гормона, стимуляцию откладки икры с помощью человеческого хорионического гонадотропина, а также сортировку поврежденных икринок или ооцитов. Итак, приступим.Для получения икры зрелых самок лягушек предварительно стимулируют с помощью гонадотропина из сыворотки беременной кобылы. Чтобы начать процедуру стимуляции, подготовьте аквариум с 100 мM раствором хлорида натрия для содержания лягушек. После инъекции стимулированных лягушек следует содержать с плотностью примерно одна особь на литр.Для поддержания оптимальной яйценоскости лягушек следует содержать при температуре 18 °C. Используя иглу 27-го калибра, присоединенную к шприцу объемом 1 мл, подкожно введите лягушке в дорсальный лимфатический мешок 0,5 мл раствора гонадотропина сыворотки беременной кобылы в концентрации 200 единиц на 1 мл.Верните подготовленных лягушек в резервуар, содержащий 100 мМ NaCl. Через два-три дня индуцируйте откладку икры, повторно введя лягушкам подкожно в дорсальный лимфатический мешок 0,5 мл раствора человеческого хорионического гонадотропина в концентрации 100 ед/мл.После инъекции поместите каждую лягушку в пять литров 100 мM раствора хлорида натрия. Рекомендуется содержать каждую лягушку в отдельном контейнере, так как качество икры варьируется от особи к особи. Примерно через 16–22 часа после инъекции хорионического гонадотропина человека перенесите лягушку в резервуар с чистой водой и слейте икру в стакан.Рекомендуется наблюдать за лягушками в течение одного-двух дней на предмет появления признаков инфекции в месте инъекции. На этом этапе каждое яйцо окружено прозрачной железистой оболочкой, которая предотвращает их слипание; чтобы очистить яйца от желе, один раз промойте их в 2% растворе цистеина с pH 8, затем продолжайте инкубацию в 100 мкл 2% раствора цистеина на одну лягушку в течение примерно пяти минут. При комнатной температуре осторожно и периодически перемешивайте яйца каждые пять минут.Слейте раствор цистеина с яиц deje и промойте их трижды в 0,25-кратном модифицированном растворе Рингера. Чтобы удалить мусор, перелейте яйца в стеклянную чашку Петри диаметром 100 мм, работая под стереомикроскопом. Удалите поврежденные яйца из чашки Петри с помощью пастеровской пипетки.Зрелые икринки xip имеют темнопигментированную верхнюю половину и светлую нижнюю половину. В центре темнопигментированного полушария зрелого яйца должно быть видно белое пятно размером с булавочный укол, свидетельствующее о созревании ооцита. Хорошим яйцом считается то, которое имеет равномерную пигментацию каждой половины.Все, что не имеет этого белого пятна, является ооцитом и должно быть удалено. Также следует удалить любые яйца, которые увеличены, имеют белый цвет или неравномерную пигментацию. Особенно непригодное яйцо будет выглядеть как белый рыхлый шар, граница между полусферами которого полностью стерта. Промойте отсортированные яйца два-три раза, наливая на них буфер для лизиса яиц, а затем осторожно сливая буфер, стараясь свести к минимуму количество вылившихся яиц.Теперь можно приступить к лизису икринок и подготовке экстрактов. Мы только что продемонстрировали вам способ получения и очистки икринок от желе от зрелых самок Xenopus lavis. Обязательно посмотрите наши два других видео, в которых показано, как готовить неочищенные экстракты из икринок, а также как восстанавливать сборку ядер in vitro с использованием фракционированных экстрактов из икринок.На этом всё. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Оплодотворение Xenopus ооцитов Использованием метода передачи хост

Xenopus эмбрионального эпителия являются идеальной системой модель для изучения ячейки поведения, таких как развитие полярности и изменением формы во время эпителиальных морфогенеза. Традиционные гистологии основных образцов все чаще дополняется жить-клеточной конфокальной микроскопии. Здесь мы показываем, методы, чтобы изолировать лягушки тканей и визуализировать жить эпителиальных клеток и их цитоскелета с использованием живых-клеточной конфокальной микроскопии.

Live-камера и цифровой обработки изображений Количественный анализ эмбриональных эпителиальных клеток в Xenopus laevis</em

Xenopus яйцо экстракт является полезной модели системы для расследования контрольно-пропускного пункта повреждения ДНК. Этот протокол предназначен для подготовки Xenopus яйцо экстракты и повреждение ДНК реагенты контрольно-пропускном пункте вызывающим. Эти методы могут быть адаптированы к различным повреждающим ДНК подходы в изучении контрольно-пропускного пункта сигнализации повреждения ДНК.

Исследование Checkpoint повреждения ДНК использовании<em&gt; Xenopus</em&gt; Экстракты Egg

Мы описываем коллекция...

Производство<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Яйцо экстракты Определить микротрубочек связанных РНК

Метод описан для анализа деградацию белков с использованием, меченные радиоактивным изотопом и люциферазы-слитые белки в Xenopus экстракта яичного и его адаптации для высокопроизводительного скрининга для малых молекул модуляторов деградации белков.

Восстановление β-катенина ухудшение<em&gt; Xenopus</em&gt; Яйцо Экстракт

Мы описываем методы манипулирования незрелыми ооцитами Xenopus laevis, созревание яйцеклеток in vitro до яйцеклеток и интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоида. Этот протокол допускает деградацию некоторых материнских белков и сверхэкспрессию генов, представляющих интерес при оплодотворении, и, следовательно, является ценным для изучения роли специфических факторов в раннем эмбриональном развитии.

Манипуляция и<em&gt; In Vitro</em&gt; Созревание<em&gt; Xenopus Laevis</em&gt; ооциты, а затем внутриклеточное инъекции сперматозоида в целях изучения эмбрионального развития

Контроль синтеза белка происходит в основном на этапе инициации трансляции, дефицит которого связан с различными нарушениями. Чтобы лучше понять их этиологию, мы описали здесь протокол с использованием ооцитов Xenopus laevis, оценивающий трансляцию транскрипта mos в присутствии мутанта фактора инициации трансляции eIF4G1.

Xenopus Laevis как модель для идентификации перевода Обесценение

Механизмы клеточного и внутриклеточного масштабирования остаются неясными. Использование экстрактов эмбрионов Xenopus становится все более распространенным для выяснения механизмов регуляции размеров органелл. Этот метод описывает приготовление экстракта эмбриона и новый анализ ядерного масштабирования, с помощью которого можно идентифицировать механизмы регуляции размера ядер.

Бесклеточной Анализ с помощью<em&gt; Xenopus Laevis</em&gt; Эмбрион Экстракты для изучения механизмов регулирования ядерной Размер

Этот протокол демонстрирует основанный на флуоресценции метод для визуализации сосудистой сети и для количественной оценки ее сложности у Xenopus tropicalis . Кровеносные сосуды можно визуализировать через несколько минут после введения флуоресцентного красителя в сердцебиение эмбриона после генетических и / или фармакологических манипуляций для исследования сердечно-сосудистого развития in vivo .

Визуализация и количественный анализ эмбрионального ангиогенеза у<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Описан способ получения и живой визуализации неразбавленных цитоплазматических экстрактов из яиц Xenopus laevis .

Xenopus laevis Подготовка экстракта яйцеклеток и методы визуализации в реальном времени для визуализации динамической цитоплазматической организации

При преобразовании фактора роста белки-предшественники семейства ß эктопически экспрессируются в эмбрионах Xenopus laevis, они димеризируются, расщепляются и секретируются в бластоцеле, которая начинается на поздней стадии бластулы до ранней стадии гаструлы. Описан способ аспирации продуктов расщепления из полости бластоцелы для иммуноблотбортного анализа.

Анализ трансформирующего фактора роста ß Семейство расщепляющих продуктов, секретируемых в бластоцеле эмбрионов Xenopus laevis

Узнайте метод получения яиц Xenopus laevis у женщин для клеточной биологии и нейронауки. Этот протокол включает индукцию откладки, сбор и сортировку яиц для качественных экспериментов.

Получение Яйца Xenopus laevis Женщины

Больше видео