ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Работа выполнена при поддержке грантов NIH EY012031 и EY0182175 и FM-Кирби Foundation.

Оптический пинцет для манипуляций изолированных клеток в культуре Захват силами оптического пинцета создаются из импульсов света (Ашкина, 1991;. Ашкина и др., 1986). Хотя эти силы легко ловушку клеток в суспензии, они не в состоянии двигаться клеток, которые придерживаются поверхности. Поэтому, чтобы уменьшить адгезию к культуре блюдо в точке, где клетки оказались в ловушке, покровное покрыта поли-2-гидроксиэтилметакрилата (поли-НЕМА) (Sigma Chemical Co, Сент-Луис, Миссури), нетоксичные соединения с сотовыми репелленты свойствами ранее для адгезии исследования на эндотелиальных клетках (Фолькмана и Moscona, 1978). Хотя поли-НЕМА охватывает половину культуры блюдо, другая половина покрыта подложкой, что поддерживает рост клеток. В нашей лаборатории, Сал-1 используется в качестве подложки для культивирования клеток сетчатки саламандры. Процедура изготовления Сал-1 и поли-НЕМА покрытием блюд, описанных ниже: Изготовление культуры блюда <ol><li> Чистая coverglasses (# 1 VWR Научно Inc, СМИ, PA) в кислоте. Это покровного стекла был выбран для его толщина всего 0,1 мм, необходимые для высокой числовой цели отверстие, необходимое для фокусировки лазера. </li><li> Чтобы создать область ячейки репеллент, растворите 20 мг поли-НЕМА (Sigma Chemical Co, Сент-Луис, Миссури) в 1 мл 95% этанола в течение ночи при комнатной температуре. Предпочтительно, это решение должно быть использовано в течение 1 месяца с момента приготовления. </li><li> Подоприте coverglasses в почти вертикальное положение в пыли окружающей среды, таких как капот. </li><li> Положите одну или две капли поли-НЕМА решение в верхней части покровного стекла с пластмассовым наконечником из 200 мкл микропипетки. Капель (около 50-100 мкл каждого) должно быть ограничено до половины покровного стекла. Крутой склон обеспечивает жидкость стекает на поверхность покровного стекла на дно, обеспечивая тонким ровным покрытием поли-НЕМА. Разрешить поли-НЕМА покрытием coverglasses сушить в капюшоне в течение 30-60 минут при комнатной температуре. </li><li> Марк поли-НЕМА стороне покровного стекла с тонким кончиком пера близко к краю. </li><li> Дрель 1 см отверстие в нижней части 35 мм культуры блюдо. </li><li> Клей поли-НЕМА покрытием покровного стекла на дно культуры блюдо с Sylgard 184 (Dow Corning Компания Midland, MI), так что поли-НЕМА покрытие боковых граней к внутренней стороне тарелки. Обеспечить краю поли-НЕМА покрытия стекает центре отверстие. Разрешить блюда высохнуть в течение 1-3 дней при комнатной температуре в пыли окружающей среды. </li><li> Царапины линию на внешней стороне покровного стекла с алмазным наконечником пера следующие краю поли-НЕМА покрытия. Потом, поцарапать двух пересекающихся линий под прямым углом к ​​ней примерно 2 мм друг от друга. Две точки пересечения служить ссылкой или координатных точках, которые будут использоваться для воспроизведения той же ориентации культуры блюдо на столик микроскопа. </li><li> Стерилизовать посуду под ультрафиолетовым светом ночь. </li><li> Для создания клеточных приверженцем половине культуры блюдо, пальто без поли-НЕМА пополам с Сал-1, который содержит мыши анти-саламандра антител, выдвигаемые против сетчатки клеточных мембран (любезно предоставлен д-р Питер MacLeish, Морхаус школы медицины , Атланта, Джорджия, см. MacLeish и др. (1983)).. Во-первых, пальто Сал-1 бок с примерно 100 мкл 0,1 мг / мл стерильного антимышиного IgG антител (Boehringer Mannheim корпорации, Индианаполис IN), стараясь не пролить жидкость на на поли-НЕМА стороны. Оставьте на три часа, затем удалить его. Мыть же районе с стерильного раствора Рингера один или два раза, затем поместите 100 мкл Сал-1 супернатант, стараясь не пролить жидкость в поли-НЕМА стороне тарелки. Первый антител обеспечивает Сал-1 покрыта в известной концентрации. </li><li> Инкубируйте блюда с Сал-1 ночь. </li><li> Удалить Сал-1 раствор антител и промойте область с стерильного раствора Рингера. Ввести 2 мл среды в блюдо непосредственно перед ячейки покрытия. </li></ol> Состав раствора амфибия Рингера, бессывороточной амфибий среде, и раствор Рингера для ферментативного расщепления находятся в MacLeish и Таунс-Андерсона (1988) и др. Манделл. (1993). Подготовка культурах клеток Клетки, которые используются в этом видео были получены от светло-адаптированы, для взрослых, водные фазы тигра саламандры (Ambystoma tigrinum), измерительные 17-22 см в длину (Charles Sullivan Inc, Nashville, TN), поддерживается на уровне 5 ° С на 12 ч: 12 ч свет-темнота цикла. Протоколы были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC) при Университете медицины и стоматологии Нью-Джерси в строгом соответствии с руководящими принципами, от Национального института здоровья. Процедуры подготовки сетчатки культурах клеток описываются Нахмана-Clewner и Таунс-Андерсона (1996) и заключаются в следующем: <ol><li> Обезглавьте и сердцевина животных. Удалите глаза и рассекать из роговицы и радужной оболочки глаза. Сетчатки должны отделить немного в наглазник. Размещая изогнутых щипцов под сетчатку, выкопайте сетчатки. Это не важно, если объектив крепится к сетчатке на данном этапе. </li><li> Дайджест сетчатки в 14 Ед / мл папаин (Уортингтон, Freehold, штат Нью-Джерси) в растворе Рингера саламандр в течение 40 минут. </li><li> Перед использованием раствор папаин Рингера должны быть клокотало с 95% O 2 / 5% СО 2 в течение 30 мин., Затем стерилизуют при прохождении через фильтр 0,22 мкм (Millipore, Carrigtwohill, Ирландия). </li><li> Промыть сетчатки с стерильного раствора Рингера саламандра в три раза. </li><li> Удалить линзы из раствора Рингера, затем осторожно растирают ткани сетчатки с 3 мм отверстие пипетки для получения клеточной суспензии. </li></ol> Лазерный пинцет манипуляции изолированных нейронов <ol><li> Место культуры блюдо на столике микроскопа, ориентируя блюдо, совместив метку на блюдо с ориентиром на сцене. Сохранить координаты реперных точек в компьютер. </li><li> Пластина клеток на обеих Сал-1 и поли-НЕМА половинки блюдо. </li><li> Разрешить клетки урегулировать в течение примерно 20 минут, что является достаточно долго, для клеток на приверженцем стороне блюдо для подключения к антитела подложки. </li><li> Выберите ячейку Сал-1 приверженцем стороне тарелки. Марк х и у координаты этапе положение, близкое к клетке. В нашем случае точка была приблизительно 10 мкм от первичной дендритов выбранной ячейки. Сохранить координаты в компьютер. </li><li> Выбор второго нейрона, в нашем случае фоторецептор, на поли-НЕМА сторону тарелку и использовать инструмент лазерный пинцет, чтобы уловить. Захват может быть достигнута в широком диапазоне уровней мощности. Тем не менее, мы устанавливаем мощность лазера на 10% -20%, что является достаточно низким, чтобы избежать захвата мусор вместе с клеткой, но достаточный для транспортировки клетку через среду. </li><li> Удерживая ячейку в ловушку, ниже этапе, с тем, что клетка значительно выше поверхности культуры блюдо и выше всех присоединенных нейронов. Перемещение сцене под управлением компьютера принести ячейку ранее сохраненные координаты х и у на Сал-1 стороны. Сценического движения была установлена ​​на уровне 8-20 мкм / с, но максимальная скорость должна быть определены эмпирически. По прибытию в пункт назначения на Сал-1 стороны, поднимать на сцену, чтобы принести ловушку ячейки на поверхности блюда. Сотовые размещения могут быть сделаны с точностью до нескольких микрон. Разрешить ячейки придерживаться Сал-1 подложке. </li><li> Получение цифровых изображений обеих клеток в паре до и после образования пар представляет собой полезный записи. </li><li> Поддерживать ячейки пар в инкубаторе. Для саламандры клетки, места блюд во влажной камере при 10 ° C. Клетки могут контролироваться с помощью видео промежуток времени и использовать с любой клетки биологических техники требуется. </li></ol>

<ol><li>Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+of+a+Single-Beam+Gradient+Force+Optical+Trap+for+Dielectric+Particles%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles.</a> Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).</li>
<li>Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+and+rod+cells+have+different+target+preferences+in+vitro+as+revealed+by+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vision%22%5BJournal%5D)">Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers.</a> Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).</li>
<li>Folkman, J., Moscona, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+cell+shape+in+growth+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Role of cell shape in growth control.</a> Nature. 273, 345-349 (1978).</li>
<li>Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+localized+cell+heating+induced+by+infrared+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers.</a> Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).</li>
<li>MacLeish, P. R., Barnstable, C. J., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, 7014-7018 (1983).</li>
<li>MacLeish, P. R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+synapse+formation+among+major+classes+of+adult+salamander+retinal+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Growth and synapse formation among major classes of adult salamander retinal neurons in vitro.</a> Neuron. 1, 751-760 (1988).</li>
<li>Mandell, J. W., MacLeish, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Townes-Anderson+E.+Process+outgrowth+and+synaptic+varicosity+formation+by+adult+photoreceptors+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Townes-Anderson E. Process outgrowth and synaptic varicosity formation by adult photoreceptors in vitro.</a> J. Neurosci. 13, 3533-3548 (1993).</li>
<li>Nachman-Clewner, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury-induced+remodelling+and+regeneration+of+the+ribbon+presynaptic+terminal+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Injury-induced remodelling and regeneration of the ribbon presynaptic terminal in vitro.</a> J. Neurocytol. 25, 597-613 (1996).</li>
<li>Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromanipulation+of+retinal+neurons+by+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis.%22%5BJournal%5D)">Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers.</a> Mol. Vis.. 4, (1998).</li>
</ol>

Свет импульс, и, когда световой луч преломляется, проходя через ячейки, сила требуется для изменения направления движения. В силу закона сохранения импульса, силы в противоположном направлении должна, в свою очередь, реагируют обратно на камеру. Ашкина (1991) показали, что сила, создаваемая с помощью лазерного луча фокусируется объективом микроскопа будет двигаться ячейки к центру внимания. Хотя лазерный луч генерирует только несколько piconewtons силы, эта сила достаточно, чтобы вытащить камеру через среду. Ближней инфракрасной длине волны...

<table><tbody><tr><td>Покрывное стекло №1, круг диаметром 25mm</td><td>VWR international</td><td>48380 080</td><td></td></tr><tr><td>поли-2-гидроксиэтилметакрилат (poly-HEMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-3932</td><td>Растворить в 95% этаноле</td></tr><tr><td>Козьи антитела против IgG мыши</td><td>Chemicon International</td><td>AP181</td><td> 1mg в 1ml, развести в 10 раз перед использованием</td></tr><tr><td>Супернатант Sal-1, содержащий мышиные антитела против саламандры</td><td>предоставлено д-ром Питером Маклейшем (Dr. Peter MacLeish)</td><td></td><td>Д-р Питер Маклейш, Медицинская школа Морхауса, Атланта, Джорджия</td></tr><tr><td>Одноразовые пирексевые пипетки объемом 5ml с диаметром отверстия 3 mm</td><td>Corning</td><td>7078A-5</td><td></td></tr><tr><td>Чашки для культивирования клеток 35mm x 10mm</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>Набор для силиконового эластомера Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Оптический пинцет-микроинструмент или лазерный пинцет</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Диодный лазер непрерывного излучения мощностью 1 W с длиной волны 980nm</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Инвертированный световой микроскоп Axiovert 100</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Объектив Plan Neofluor с масляной иммерсией, увеличение 40x</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Числовая апертура (N.A. 1.3)</td></tr><tr><td>Черно-белая CCD-камера</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Компьютер и джойстик с программным обеспечением</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td>для управления моторизованным предметным столиком</td></tr></tbody></table>

Использование лазерный пинцет для манипуляций Изолированные нейроны in vitro

Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro

В данной работе и видео, мы описываем протоколов, используемых в нашей лаборатории для изучения ориентации предпочтения регенерации клеточных процессов взрослых нейронов сетчатки в пробирке. Порядок подготовки сетчатки клеточных культурах начинается с рассечение, пищеварения и растирания сетчатки, а в конце покрытия изолированных клеток сетчатки на блюда, приготовленные специально для использования с лазерным пинцетом. Эти блюда делятся на половину ячейки клей с половиной ячейки репеллент. Стороны ячейки клей покрыта слоем Сал-1 антител, которые обеспечивают подложки, на которой наши клетки расти. Другие клей подложки могут быть использованы для других типов клеток. Стороны ячейки репеллент покрыта тонким слоем поли-НЕМА. Клетки высевали на поли-НЕМА стороне блюда оказались в ловушке с лазерным пинцетом, транспортировались и затем помещается рядом с ячейкой на Сал-1 стороной для создания пары. Формирование группы клеток любого размера должно быть возможным с этой техникой. &quot;Лазерный пинцет контролируемых микроманипуляция&quot; означает, что исследователь может выбрать, какие клетки необходимо переместить, и необходимое расстояние между клетками может быть стандартизирована. Поскольку лазерный луч проходит через прозрачную поверхность культуры блюдо, выбора ячейки и размещение делается в закрытых, стерильной среде. Клетки могут контролироваться с помощью видео покадровой и использовать с любой клетки биологических техники требуется. Эта техника может помочь исследование межклеточных взаимодействий.

Это видео описывает манипуляции культурный нейронов помощью лазерного пинцета в пробирке.

Использование лазерный пинцет для манипуляций Изолированные нейроны In Vitro

В данной статье и видеоролике мы описываем протоколы, используемые в нашей лаборатории для изучения предпочтений в таргетинге регенерирующих отростков клеток взрослых...

Ашкин первым продемонстрировал, что лазерные пинцеты или оптические ловушки являются мощным инструментом для манипулирования микроскопическими объектами живой природы. В этом видео мы покажем, как мы применили эту технологию для захвата и перемещения нейронов. Перед вами рабочая станция оптического пинцета.Зеленые стрелки показывают путь лазерного луча через оптику микроскопа. Когда лазерный луч, сфокусированный объективом микроскопа, преломляется клеткой, сила, изменяющая направление светового луча, воздействует на клетку, перемещая ее к центру фокуса.Это создает силу в несколько пиконьютонов, достаточную для перемещения клетки в среде. В данном видео мы обсудим изготовление чашек, подготовку клеток сетчатки, посев клеток в культуральные чашки, манипуляции с помощью лазерного пинцета и наблюдение за ростом клеток. Поскольку клетки прилипают к стеклу, нам потребовалось создать область, отталкивающую клетки, чтобы их можно было легко захватить пинцетом.Половина чашки была покрыта poly hema — полимером, препятствующим прикреплению клеток. Другая половина была покрыта cell one — субстратом, который поддерживает рост наших клеток. Сначала на адгезивной стороне чашки идентифицируют клетку.Затем другая клетка захватывается со стороны полимера и переносится на адгезивную сторону, где обе клетки соединяются в пару. Для подготовки чашек мы используем стерильные культуральные чашки Polystar диаметром 35 мм, очищенные с помощью обдува. Сначала мы проделываем в дне отверстие диаметром 1 см с помощью небольшого токарного станка или сверлильного пресса.Возьмите очищенные кислотой покровные стекла и установите их вертикально в безпыльную среду, например, в вытяжной шкаф. Возьмите раствор polyus, растворенный в 95% спирте, и нанесите несколько капель в верхней части покровного стекла только на одну его половину. Дайте poly hema высохнуть. Пометьте сторону покровного стекла с нанесенным polyus.Разместите уплотнитель S вокруг отверстия в дне чашки для культивирования. Приклейте покровное стекло к чашке с помощью уплотнителя S. Убедитесь, что полиамид находится внутри, а также проверьте отсутствие утечек через зазоры в уплотнителе.Поместите покровное стекло так, чтобы край слоя poly hema проходил по центру чашки. Дайте чашке высохнуть в течение двух-трех дней, затем нанесите на дно чашки метки алмазным резцом, которые будут служить ориентирами для позиционирования чашки на предметном столике микроскопа. Поместите чашки в вытяжной шкаф и стерилизуйте их под воздействием ультрафиолетового излучения.Нанесите одну или две капли раствора антител козы к US на сторону чашки без полиуса, стараясь не пролить раствор на полигемическое покрытие, и оставьте примерно на три часа. Удалите раствор и промойте стерильным раствором Рингера. Нанесите на ту же область раствор первичных антител к клеткам и инкубируйте в течение ночи, чтобы подготовить образец к эксперименту на следующий день.Клетки в нашей лаборатории получены из сетчатки взрослых саламандр на водной фазе развития. Сетчатки диссецируют и извлекают, после чего подвергают ферментативному перевариванию. Затем изолированные клетки можно высеять в чашку для культивирования.Глаза удаляют. Роговицу иссекают и удаляют. Глазное яблоко помещают в стерильный раствор Рингера.Сетчатку отделяют от глазного яблока, аккуратно вынимая ее краем изогнутого пинцета. Диоксид углерода и кислород пропускают через раствор Рингера, содержащий пропан, после чего раствор стерилизуют с помощью ультратонкого фильтра с порами 0,2 micron. Сетчатки помещают в раствор фермента и подвергают перевариванию в течение примерно 40 минут при перемешивании для расщепления ткани.После трехкратного промывания сетчатки подвергают диссоциации с помощью трипсина. Изолированные клетки собирают пипеткой с шариком диаметром 3 мм; теперь они готовы к посеву. Чашку с питательной средой помещают на предметный столик микроскопа и ориентируют соответствующим образом, используя метки на дне чашки.Это позволяет в будущем в точности воспроизвести положение планшета. Затем клетки высевают на обе стороны планшета: на сторону с poly hema и на сторону cell one. Положение планшета на предметном столике микроскопа, а также мощность лазера регулируются с помощью джойстика.Сначала мы определили клетку, прикрепившуюся к одной стороне чашки. Это мультиполярная клетка сетчатки, которую можно идентифицировать по ее дендритам. Координаты положения клетки были сохранены.Это палочкообразная фоторецепторная клетка, находящаяся на стороне чашки с репеллентом для клеток polyus. Чашка опускается, лазер захватывает клетку и поднимает ее над дном чашки. Теперь клетка транспортируется в другую часть чашки к координатам мультиполярной клетки.На самом деле клетка неподвижна. Двигается сама чашка. Сейчас клетка проходит через край полигемового покрытия.Выступ, extending из клетки, представляет собой аксонный терминал. Клетка находится достаточно далеко от любого детрита и других клеток на дне чашки, которые могли бы препятствовать ее движению. На заднем плане видны расфокусированные изображения клеток на дне чашки.Палочковая клетка перемещается к мультиполярной клетке и может быть точно расположена в нужной точке и на заданном расстоянии от нее. Чашку поднимают, и клетка прикрепляется к субстрату первой клетки. Основными преимуществами данной процедуры являются возможность выбора перемещаемых клеток и возможность проведения манипуляций в закрытой стерильной экспериментальной системе.Межклеточные взаимодействия можно отслеживать с помощью видеозаписи с интервалом во времени или цифровой фотографии. Лазерный пинцет может быть использован в сочетании с любым биологическим методом. Здесь, например, метод флуоресценции демонстрирует наличие синаптических белков в точках контакта между клетками, перемещаемыми с помощью пинцета.

using-laser-tweezers-for-manipulating-isolated-neurons-in-vitro

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

В этом видео-работе предлагается метод выделения одной или...

Лазерная Захват микродиссекции Drosophila Периферийные Нейроны

Протокол сократить нейронов...

В естественных условиях лазерной Axotomy на языке C. Элеганс

Это видео демонстрирует метод выделения флуоресцентно помеченных нейронов из мозга мыши.

Выделение флуоресцентно меченых нейронов из мозга мышей

Источник: Morsch, M.,  , Запуск клеточного стресса и смерти с помощью обычной УФ-лазерной конфокальной микроскопии. J. Vis. Exp. (2017)...

Селективная однонейронная лазерная абляция у личинки данио-рерио с использованием конфокального микроскопа

Недавнее развитие нейронауки, которые объединяли бы генетику и оптики, называется "Optogenetics", позволяет контролировать нейронной активности замыкания с беспрецедентным уровнем пространственным и временным разрешением. Здесь мы предлагаем протокол для интеграции в записи естественных условиях с optogenetic манипуляции генетически определенных подмножеств префронтальной коры и subicular пирамидальных нейронов.

Метод высокой верности Optogenetic управление отдельными пирамидальных нейронов<em&gt; В естественных условиях</em

Мы измеряли напряжение выпуска в аксон, который был частично поврежденных с помощью лазера рассекатель одновременное измерение силовой спектроскопии проводили на оптически-ловушки зонд приклеен к мембране аксона. Разработанный экспериментальный протокол оценивает аксон адгезию к культуральной подложки.

Измерение Ослабление натяжения в процессе лазерного поражения Индуцированные Axon для оценки аксонов адгезию к основанию и Piconewton в миллисекундах

Клетки человека нейрональные (NPC) были расширены под пролиферирующих условиях. НПС дифференцировались в нейронных богатых культур в присутствии комбинации нейротропинов. Нейронные маркеры были обнаружены иммунофлуоресцентного окрашивания. Чтобы изолировать чистую популяцию нейронов, НПС были дифференцированы на PEN мембранных горками и лазерная захвата микродиссекции была выполнена.

Лазерная Захват микродиссекция нейронов от Дифференцированный человека нейрональные клетки в культуре

Мы описываем метод характеристики функциональной топографии и синаптических свойств цепей переднего мозга с использованием оптогенетического подхода для фотостимуляции нейронных популяций in vitro.

Лазерная сканирующая фотостимуляция оптогенетически нацеленных контуров переднего мозга

Двухфотонное изображений, в сочетании с лазерной nanodissection, являются полезными инструментами для изучения дегенеративные и регенеративные процессы в центральной нервной системе с субклеточной резолюции. Этот протокол показывает, как маркировать, изображение, и анализировать одиночные альпинистские волокон в коре мозжечка в естественных условиях.

Лазерная нанохирургии мозжечка Аксоны<em&gt; В Vivo</em

Изоляция отдельных нейронов допамина или вентральной покрышки площадь с прямым или косвенным иммуногистохимии показано методом лазерной съемки микродиссекции. Обсуждаются Параметры для изоляции ткани из стекло с помощью инфракрасного лазера и от мембранных слайдов с использованием сочетания инфракрасного и ультрафиолетового лазера.

Лазерная Захват микродиссекция - Демонстрация изоляции отдельных допамина нейронами и вся область брюшной покрышки

Мы описываем технику, чтобы маркировать нейроны и их процессы с помощью Антероградный или ретроградная трассирующих инъекций в ядрах головного мозга с использованием препарата в пробирке. Мы изменили существующий метод из п я пробирке трассирующими электропорации, воспользовавшись флуоресцентно меченного мутантов мыши и основную оптического оборудования с целью повышения точности маркировки.

Лазерным наведением нейронов в головном мозге Трассировка Экспланты

Узнайте манипуляцию культивируемыми нейронами с помощью лазерных пинцетов in vitro. Этот метод позволяет точно захватывать и перемещать клетки для изучения нейронного поведения и клеточных взаимодействий в нейробиологических исследованиях.

Использование лазерный пинцет для манипуляций Изолированные нейроны In Vitro

Больше видео