Обонятельные Поведенческие Тестирование в взрослой мыши

Ольфакторная система грызунов или обоняние стали все более популярной областью исследований. Для проверки обонятельной чувствительности мышь помещают в клетку без подстилки для привыкания, после чего ей предоставляют кусочки фильтровальной бумаги, содержащие возрастающие концентрации одоранта. Затем фиксируется время, которое мышь затрачивает на исследование фильтровальной бумаги.

Тестирование ольфакторных предпочтений проводится точно таким же образом. Однако вместо увеличения концентрации одоранта фиксируется время, которое мышь тратит на исследование различных одорантов. Здравствуйте, я Рошель Витт из лаборатории доктора Розалин Сигел на кафедре нейробиологии Гарвардской медицинской школы.

Здравствуйте, меня зовут Дженнифер Дено, я также работаю в лаборатории Сигеля. Сегодня мы продемонстрируем две процедуры тестирования обоняния. Мы используем эти методы в нашей лаборатории для изучения обонятельной чувствительности и обонятельных предпочтений.

Итак, приступим. Для начала процедуры тестирования обонятельной чувствительности возьмите четыре чистые клетки без подстилки. Размер клеток должен составлять 8 дюймов в высоту, 10 дюймов в ширину и 18 дюймов в длину.

Расположите четыре клетки в боксе биологической безопасности. Затем установите перегородки между каждой ареной, используя непрозрачную фильтровальную бумагу. После этого поместите черный лист ватмана поверх последней перегородки так, чтобы он закрывал боковую стенку и дно клетки.

Обеспечьте освещение арены, накрыв верхнюю часть клетки прозрачным листом оргстекла. Теперь начните привыкание субъектов к данной процедуре. Поместите первого субъекта в первую клетку.

Через 15 минут перенесите первую особь во вторую клетку. Очистите первую клетку с помощью Quatra side tb. Затем поместите вторую особь в первую очищенную клетку.

Повторите этот процесс с последующими животными перед началом тестирования. Поместите одно из животных в четвертую клетку и обеспечьте привыкание в течение еще 15 минут. В итоге в каждой из первых трех клеток должно находиться привыкшее животное.

Теперь мы готовы к подготовке образцов запаха. Образцы запаха должен готовить другой исследователь, который не знает субъекта, генотипов и/или условий эксперимента. Начните подготовку образцов с вырезания необходимого количества квадратов из фильтровальной бумаги размером два на два дюйма.

Затем приготовьте соответствующие разведения выбранного запаха в конических пробирках. Имейте в виду, что для разных линий мышей могут потребоваться разные степени разведения запаха для эффективного разграничения контрольной и экспериментальной групп. Исходя из этого наблюдения, мы считаем полезным эмпирическим путем подбирать подходящие разведения запаха на субъектах, схожих с контрольной группой, прежде чем переходить к экспериментальному тестированию наивных мышей. Для гидрофобных образцов, таких как арахисовое масло, в качестве растворителя используйте масло; для всех остальных образцов — подходящий растворитель.

Используйте вортекс с дистиллированной водой, чтобы убедиться, что разведения тщательно перемешаны. Затем установите устройство цифровой видеозаписи в дальнем конце вытяжного шкафа так, чтобы весь конец клетки находился в фокусе. Снимите предварительное видео, чтобы убедиться в правильности настроек камеры.

В лабораторном журнале запишите последовательность тестируемых разведений, стараясь рандомизировать порядок в каждом испытании. Также зафиксируйте номер помета и идентификационный номер субъекта. После того как субъект проведет в арене 15 минут для привыкания, приступите к подготовке к первому испытанию.

Несколько раз перемешайте первое разведение в конической пробирке с помощью пипетирования, после чего нанесите его на квадрат фильтровальной бумаги. Оптимально, чтобы поверхность фильтровальной бумаги была заполнена примерно на 85%. Используйте салфетку Kim wipe, чтобы убедиться, что фильтровальная бумага не перенасыщена.

После того как ароматизированная фильтровальная бумага подготовлена, можно приступать к первому испытанию обонятельной чувствительности. Для начала испытания запустите видеозапись. Затем поместите ароматизированную фильтровальную бумагу в клетку с противоположной стороны от текущего положения животного.

Запустите таймер. Через три минуты остановите запись и уберите источник запаха. Затем снова запустите таймер и подготовьте второй образец запаха.

Через одну минуту начните видеозапись. Как и ранее, поместите образец запаха в клетку с противоположной стороны от текущего положения животного. Повторите эту процедуру для каждого разведения запаха и для каждого испытуемого; не забудьте записать номер видеофайла для каждой попытки.

Теперь, когда мы продемонстрировали вам метод тестирования обонятельной чувствительности, перейдем к тестированию обонятельных предпочтений. Для тестирования обонятельных предпочтений следуйте той же процедуре, которая была описана для тестирования обонятельной чувствительности, за исключением двух небольших модификаций. Первая.

Вместо приготовления нескольких разведений одного заранее выбранного запаха, приготовьте как привлекающий, так и отталкивающий запах. Во-вторых, вместо записи конкретного разведения для тестирования, определите порядок предъявления варьируемых стимулов, рандомизируя этот порядок в каждом испытании. Все остальные этапы процедуры идентичны обонятельному тестированию, включая габитуацию испытуемых, участие «слепого» исследователя, нанесение запаха на фильтровальную бумагу и запись каждого испытания на видео с контролем времени.

После завершения тестирования обонятельных предпочтений перейдите к оценке результатов. Собрав все видеозаписи тестов на обонятельную чувствительность и предпочтения, подсчитайте общее время, которое испытуемый затратил на изучение каждого разведения или запаха для обеспечения согласованности данных. Для проведения этого анализа привлеките исследователя, не осведомленного о принадлежности образцов.

Рекомендуется сначала предварительно просмотреть видео и отметить следующие моменты: когда фильтровальная бумага помещена в арену, когда мышь приближается к фильтровальной бумаге, когда мышь исследует фильтровальную бумагу и когда с момента первоначального помещения бумаги в арену прошло три минуты. Знание того, на каких этапах следует сосредоточиться на поведении мыши, облегчит точный подсчет общего времени исследования при повторном просмотре. Теперь просмотрите видео полностью. Используйте секундомер для замера времени всех исследований в течение трех минут после помещения фильтровальной бумаги в арену.

Время исследования определяется как любой интервал времени, в течение которого нос мыши находится на расстоянии менее одного миллиметра от фильтровальной бумаги; важно не учитывать время, когда мышь находится в непосредственной близости от бумаги, но не исследует ее активно. Не включайте в общее время исследования эпизоды разгрызания и вылизывания бумаги, а также эпизоды сидения на ней. Строго и последовательно придерживайтесь этих правил для точного анализа обонятельного поведения.

После просмотра видеозаписи и определения общего времени исследования фильтровальной бумаги повторите анализ для всех видео. Ниже представлены репрезентативные результаты обонятельного тестирования. На этом первом графике показаны результаты сессии тренировки обонятельной чувствительности.

Каждая мышь из экспериментальной группы B или контрольной группы A подвергалась воздействию одного из пяти различных разведений экстракта корицы на фильтровальной бумаге в течение одного трехминутного сеанса. Было оценено общее время исследования фильтровальной бумаги, и на данном графике представлены результаты сеанса тестирования ольфакторных предпочтений. Каждая мышь подвергалась воздействию каждого из различных запахов на фильтровальной бумаге в течение одного трехминутного сеанса.

Оценивали общее время исследования фильтровальной бумаги. Мы только что продемонстрировали способ тестирования обонятельных способностей взрослой мыши; при использовании этих процедур важно применять наивных мышей, чтобы точно оценить именно обонятельные способности, а не какие-либо другие функции, такие как обучение и память. На этом всё.

Спасибо за просмотр, и удачи в ваших экспериментах.