تطبيق الكهربية لنقاط الاشتباك العصبي للوصول يوفر قدرا من النشاط متشابك قابلة للقياس الكمي ، ومفيدة في تحليل المسوخ متشابك. توضح هذه المقالة أسلوب تشريح المستخدمة للكشف عن الوصلات العصبية والعضلية (NMJ) من ايليجانس انواع معينة (جيم ايليجانس) ويناقش بإيجاز بعض الاستخدامات التي يمكن تطبيق هذا الإعداد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشريح والتسجيل من مفرق العضلية جيم ايليجانس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العصبي هو العملية التي من خلالها نقل المعلومات عن طريق الخلايا العصبية إشارات كيميائية إلى أهداف بعد متشابك بهم ، على المقياس الزمني السريع. هذه عملية معقدة تتطلب الكثير من النشاط المنسق البروتينات قبل وبعد متشابك لضمان اتصال متشابك المناسبة ، توصيل الإشارات الكهربائية ، واستهداف وفتيلة من حويصلات إفرازية ، والاستشعار من الكالسيوم ، والانصهار الحويصلة التوطين ، ووظيفة المستقبلات بعد المشبكي وإعادة التدوير وأخيرا ، الآليات. علماء الأعصاب كما ان هدفنا هو توضيح البروتينات التي تعمل في كل من هذه الخطوات وفهم آليات عملها. التسجيلات الكهربية من نقاط الاشتباك العصبي توفير الكمي تلا الأحداث الكامنة الكهربائية التي تحدث أثناء انتقال متشابك. من خلال الجمع بين هذه التقنية مع مجموعة قوية من الأدوات الجزيئية والجينية المتاحة لمعالجة البروتينات متشابك في C. ايليجانس ، يمكننا تحليل التغييرات الناتجة الفنية في نقل متشابك.
وجيم ايليجانس NMJs تشكلت بين الخلايا العصبية الحركية وتحرك عضلات الجسم السيطرة الجدار ، وبالتالي ، المسوخ مع الظواهر غير منسقة locomotory المعروفة باسم (UNC) مفتاحية انتقال كثير من الأحيان متشابك التشويش في هذه المشابك 1. منذ تمسك المسوخ UNC على إمدادات غنية من مصدر الغذاء البكتيري ، إلا أنها تظل قابلة للحياة ، طالما أنها لا تزال تحتفظ ببعض القدرة على ضخ البلعوم لاستيعاب المواد الغذائية. هذا ، جنبا إلى جنب مع حقيقة أن جيم كما توجد ايليجانس المخنثين ، ويسمح لهم بالمرور على ذرية طافرة من دون الحاجة إلى التزاوج السلوكيات بمزيد من التفاصيل. هذه الصفات ، إلى جانب قدرتنا الأخيرة إلى سجل من الديدان NMJs 2،3،7 جعل هذا الكائن الحي الذي نموذجا ممتازا للتصدي على وجه التحديد كيف UNC العصبي أثر المسوخ.
الأسلوب ينطوي على تشريح الديدان البالغة شل حركة باستخدام الغراء cyanoacrylic من أجل إجراء شق في جليدة الدودة تعريض NMJs. منذ C. ايليجانس الكبار فقط 1 ملم في الطول يتم إجراء تشريح مع استخدام مجهر تشريح ممتازة ، ويتطلب التنسيق بين اليد والعين. والتسجيلات التي NMJ كامل الخلية يمكن لقط أثار الجهد الفردي خلايا عضلات الجسم الجدار والافراج عن العصبي باستخدام مجموعة متنوعة من البروتوكولات بما في ذلك تحفيز التحفيز الكهربائي ، وعلى ضوء تنشيط قناة رودوبسين بوساطة الاستقطاب 4 و ملحي مفرط التناضح ، والتي سيتم ووصف فترة وجيزة.
البروتوكول
A. إعداد الأدوات المستخدمة لتشريح.
- غرفة التشريح / تسجيل : نحن عادة بناء غرفة تسجيل لدينا ورقة من أصل 1 / 16 عشر المغناطيسي بوصة ، مع وجود ثقب دائري ثقبه المركز الذي هو كبير بما يكفي لاستيعاب قطرها 22 مم دائري من الزجاج غطاء. سوف أبعاد الخارجي للغرفة تعتمد على المسرح الاداة المستخدمة للقيام التسجيلات. على الجانب العكسي من ورقة المغناطيسي ، ونحن نعلق تغطية 48 × 60 ملم زلة ، التي نتمسك بها الغرفة من خلال وضع بيليه المنخفض من الشمع يذوب الأنسجة Paraplax التضمين في كل زاوية من الغطاء زلة تقع بين الزجاج وحجرة . ثم ذاب الشمع الساخن عل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وهو مثالي للكائن النموذج الجيني C ، ايليجانس لدراسة انتقال متشابك ، من خلال التحليل الوظيفي من الطفرات في الجينات ترميز البروتينات متشابك. هنا قد وصفنا تقنية التشريح أن يجعل C. ايليجانس NMJs الوصول لتحليل الكهربية. يصور شريط الفيديو المرافق الخطوات الحاسمة في C. ايليجانس التشريح والتكوين تسجيل المعتادة المستخدمة لقياس النشاط متشابك. الخطوات الثلاث التي تشكل أكبر التحديات في تعلم هذه التقنية هي : 1) الغراء دودة الخطوة ، 2) إجراء شق ناجحة ، و 3) التصحيح إل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذه المقالة عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لJER. وأود أن أشكر الدكتور أليكس جوتشالك لتوفير الديدان المعدلة وراثيا في التعبير عن قناة رودوبسين الخلايا العصبية الحركية كوليني المستخدمة في واحدة من المظاهرات التسجيل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- Brenner, S. Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).
- Richmond, J. E. WormBook. 1, (2006).
- Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).
- Lockery, S. R., Goodman, M. B. Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).
- Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).
- Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. Nat Neurosci. 2 (9), 7....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
