Method Article

MCF - 7 세포주에서 세포 독성 Nanogenomedicine의 : MTT 분석

DOI:

10.3791/1191

⸱

April 3rd, 2009

 ,  ,  ,  , 
1Research Center for Pharmaceutical Nanotechnology, Faculty of Pharmacy, Tabriz University (Medical Sciences), 2Gifted and Talented Students Office, Educational Development Center, Tabriz University (Medical Sciences), 3School of Advanced Biomedical Sciences, Tabriz University (Medical Sciences)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MTT 분석은 노란색 MTT의 감소와 물 불용성 보라색 formazan의 생산을 기반으로 세포 생존 능력 평가를위한 간단하고 재현성 colorimetric 분석이다. 여기 nanogenomedicine 치료시 MCF - 7 세포의 생존 능력이 평가되었습니다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

미래 nanogenomedicine (예, 짧은 간섭 RNA와 안티 센스)의 세포 독성은 임상 개발을 방해 수 있습니다. 이들 중, 유전자 기반의 의학 및 / 또는 이동 통신사에서 세포 독성을 이끌어 수 있습니다. 이러한 세포 독성 평가를위한 일반적인 방법론 3의 활용에 따라 크게 좌우된다 - (4, 5 - 디메틸 - 2 - thiazolyl) 널리 사용되었습니다 -2, 5 - 디페닐 - 2 시간 - tetrazolium 브로마이드 (MTT) 분석 세포 mitochondrial 탈수소 효소의 활동을 기반으로하는 colorimetric 접근. 이 현재 조사에서, MCF - 7 세포는 96 - 웰 플레이트에 주사했다 50 % confluency에서 그들은 서로 다른 nanopolyplexes 대우했다, 24 시간 후 MTT 분석을 들어서는. 수용성 황색 MTT는 더욱 dimethylsulfoxide 및 Sornson의 버퍼 산도 10.5에 녹아있는 물에 불용성 보라색 formazan에 metabolically 활성 세포에 의해 대사됩니다. 결과 제품은 570 nm의에서 플레이트 판독기를 사용하여 분광 광도법으로 계량하실 수 있습니다.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

96 - 웰 플레이트에 MCF - 7 시딩 :

MCF - 7 세포는 37 Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 10 % FBS, 100 U / ML 페니실린, 100 μg / ML 스트렙토 마이신을 포함하는 배지에서 25 T - 플라스크에 교양되었습니다 ° C 5% CO 2, 95 %를 공기와 습기 완료. 일단 ~ 90 % confluency에 도달, 그들은 0.05 % 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 사용하여 분리하고 trypan 파란색과 hemocytometer에 의해 계산되었다. 이러한 전지는 다음 4 농도 × 10 4 세포 / cm 2 resuspended 및 8 채널 피펫으로 (즉, 250 μl / 음) 96 - 웰 플레이트에 추가되었습니다. 배경 흡수 들어, 일부 우물은 빈 제어로 휴대가없는, 즉 남아 있었다.

다른 nanopolyplexes와 세포 치료 :

40-50%에서 (48 시간 이후에 씨를 뿌린다) confluency, 재배 전지 nanostructured 스타 버스트 polyamidoamine의 dendrimers (즉, Sup....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MTT 분석은 다양한 방법으로 간주하고 이에 따라 세포의 생존은 다양한 치료시 평가 수 있습니다. 결과 formazan의 생산은 세포의 에너지 대사의 수준에 비례하는 것 같아요. 따라서도 세포 증식의 부재에 metabolically 활성 세포를 측정할 수 있습니다. 생산 formazan의 양은 배양 매체에서 MTT의 금액에 비례합니다. 동안 formazan의 최대 금액을 달성하는 데 필요한 MTT의 농도는 다른 세포 라인의 활용도에 따라 변경될 수 있습니다를 생산. 게다가,이 분석을 사용하는 데, 살아있는 세포의 매우 작은 번호가 감지 될 수 있으며, 세척 단계를 필요가 없기 때문에 오류의 발병률은 최소한의 것입니다. formazan의 흡수는 pH의 10.5 1 버퍼를 추가로 극복할 수있는 핸드폰 번호뿐만 아니라 산도에 따라 다릅니다. formazan의 색상은 상온 2 몇 시간 동안 안정합니다. 하나 이상의 접시의 경우에는 컨트롤뿐만 아니라 다른 접시에 포함되어야합니다. 그럼에도 불구하고.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 선물로 주입에 대한 페놀 빨간색과 멸균 물없이 DMEM을 제공하는 각각 줄기 세포 기술과 샤히드 Ghazi 타브 리즈 회사를 인정하고 싶습니다.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
25 t-플라스크오렌지 사이언티픽5510100
PBS시그마-알드리치P3813
둘베코 의 변형된 독수리' s 매체 - 고혈당시그마-알드리치D5671
MTT, 시그마-알드리치M2128
FBS시그마-알드리치F2442
페니실린 200,000 u/mlCinnaGenCR7913
스트렙토마이신 200 mg/mlCinnaGenCR7912
트립신/EDTA시그마-알드리치T3924
trypan 블루시그마 - 알드리치T8154
SuperfectQiagen301105
PolyfectQiagen301305
EGFR 안티 센스유로 핀 MWG 오페론
스크램블 안티 센스유로 핀 MWG 오페론
DMEM, 페놀 레드GIBCO 없음, 라이프 테크놀11880
글리신시그마-알드리치G8898
혈구계HBG
8채널 피펫TreffLab Transferpette96.9918.10.1
일회용 주사기 필터 이와키, 아사히 테크노 글라스 주식회사2052-025
570nm 및 플레이트가 장착된 플레이트 리더 630nm 필터 BioTekELX808
96웰 플레이트(뚜껑 포함)(바닥이 편평함)Iwaki, Asahi Techno Glass Corp.3860-096
층류 후드Esco Products
CO2 인큐베이터ASTEC
, , , 로지

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Cancer Research. 49, 4435-4435 (1989).
  2. Mosmann, T.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Nanogenomedicine CytotoxicityMCF 7 Cell LineMTT AssayCellular ToxicityGene Based MedicineAntisense OligonucleotidessiRNA DeliveryCell Viability AssaySpectrophotometry Plate ReaderNanopolyplex Treatment

Related Articles