L'organisation anatomique du cerveau des primates peuvent fournir des indications importantes sur les conditions normales et pathologiques chez l'homme. Stéréologie impartiale est une méthode précise et efficace pour l'estimation du nombre de neurones totale (ou autre type cellulaire) dans un espace de référence donnée<sup> 1</sup>.
Abstract
Le primate non-humain est une espèce importante translationnelle pour comprendre les processus normaux et pathologiques de la fonction du cerveau humain. Stéréologie impartiales, la méthode acceptée que l'état de l'art pour la quantification des objets biologiques dans des coupes de tissus<sup> 2</sup>, Génère des données fiables pour les caractéristiques biologiques de structure dans le cerveau des mammifères<sup> 3</sup>. Les composantes clés de l'approche sont impartiales (systématique aléatoire) d'échantillonnage des structures anatomiquement définis (espaces de référence), combinée à la quantification du nombre de cellules et des longueurs de taille, de fibres et capillaire, surfaces, volumes régionaux et les distributions spatiales des objets biologiques dans le espace de référence<sup> 4</sup>. Parmi les avantages de ces approches par rapport aux méthodes précédentes stéréologiques est l'évitement de toutes les sources connues d'erreur systématique (non aléatoire) découlant de fausses hypothèses et non vérifiables modèles. Cette étude documente une application biologique de stéréologie informatisé pour estimer la population totale des neurones dans le cortex frontal du cerveau de singe vervet (<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), Avec l'aide de deux programmes stéréologie disponibles dans le commerce, Sciences de la Vie et de BIOQUANT Stereologer (figure 1). En plus de contraste et comparaison des résultats à la fois du BIOQUANT et<em> Stereologer</em> Systèmes, cette étude fournit un protocole détaillé pour la<em> Stereologer</em> Système.
Protocol
Partie 1: Pré-traitement du tissu doit être fait en fonction de Burke et al. (2009) 5. En bref, le tissu doit être bien perfusés avec du paraformaldéhyde, glutaraldéhyde, ou du formol. Ceci peut être réalisé grâce à la perfusion transcardial norme généralement utilisée pour la récolte d'autres organes. Dans l'étude actuelle, l'objet a été profondément sédatés avec le chlorhydrate de kétamine (10 mg / kg, im), euthanasiés avec une overdose de pentobarbital sodique …
Discussion
Stéréologie impartiaux dans un cerveau de primate est similaire à celle des autres échantillons biologiques. Toutefois, étant donné la taille du cerveau des primates, un plan de traitement minutieux est recommandée car un seul hémisphère de l'singe vervet rendements de plus de 1200 sections quand tranché au 50 microns. Premièrement, nous recommandons stéréotaxique bloquant le cerveau en blocs de 1 cm, qui fournit un plan standard de la section entre les blocs et les sujets, minimise coupes partielles en…
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier pour son Ikiel Ptito appui technique continu. Subvention du CRSNG au MP.
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).