이 문서의 꽃 - 수영 방법을 보여줍니다 Agrobacterium tumefaciens - 중재 변환 Arabidopsis thaliana. 세포주기 조절 발기인 - 기자를 소개함으로써, pTSO2 : β - glucuronidase (거스)로 Arabidopsis 우리는 하나가 유전자 변형 모종의 거스 기자 표현식을 감지하는 방법을 보여줍니다.
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방법 논문
의 꽃 - 물놀이 변환 Arabidopsis thaliana 검사 pTSO2 : β - glucuronidase 리포터 유전자 발현
이 논문에서
요약
초록
유기체로 외국 유전자를 도입하는 능력은 현대 생물학과 생명 공학에 대한 기초입니다. 모델 꽃 공장에서
프로토콜
I. 꽃 - 물놀이 Arabidopsis thaliana의 변화
- 이전 변환에 약 1 개월, 냄비에 약 10-15 식물 4-8 냄비 (5 인치 사각형 냄비)에 Arabidopsis 씨를 뿌리다. 정상 다산과 식물, 플라스미드 구조마다 식물의 4 냄비는 충분합니다. 하나는 감소 다산과 돌연변이 Arabidopsis를 변환하는 경우, 그에 따라 냄비의 수를 증가시킵니다.
- 식물은 표준 약관 (22 16 시간 조명과 어두운 8 시간 ° C)에서 재배하고 있습니다. 식물은 짧은 하루 더 낮은 온도 하에서 재배하는 경우, 그들은 변화를 위해 준비하는 꽃 이상으로 오래 걸립니다. 좋은 식물 관리는 성공적인 변화를위한 필수적인 건강한 식물을 보장합니다.
- 식물은 나올와 꽃으로 시작하는 경우. 그들은 지금 변화를위한 준비가되어 있습니다. 변환 효율을 향상시키기 위해, 3-4일 변환하기 전에, 곧 그들은 더 많은 보조 촬영 형성을 장려하기 위해 나올 필요로 메인 꽃이 핌 골인을 잘라. 식물 변환 전날 물. 이것은 토양이 꽃의 수영하는 동안 너무 많이 침투 미디어를 흡수하지 않을 보장합니다.
- Agrobacterium tumefaciens 변형 GV3101은 pTSO2를<....
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토론
변환 효율은 아래 설명하는 여러 가지 요인에 의해 결정됩니다 :
- 식물의 건강과 자신의 나이가 기본 중요합니다. 다수의 미숙 꽃 봉오리를 생산 약 한 달쯤 식물 이상적입니다. 변환하기 전에 보조 촬영 형성 3-4일 권장하는 기본 골인을 트리밍하는 것은 변환 효율을 증가합니다. 이전 식물 transformants을 일으키다하지만 낮은 비율로합니다.
- 식물의 불임은 중요하다. 하나는 감소 다산과 돌연변이를 변환하는 경우, 많은 식물은 찍기 위해 필요한 것입니다.
- 침투 버퍼의 0.3 % Silwet L - 77 계면 활성제가 필수적인 것으로 간주됩니다.
- 침투 미디어에서 시간을 디핑 것은 적어도 5 분 정도한다.
- 곰팡이 오염을 줄이기 위해 몇 가지주의 사항을 주의해야한다. 첫째, 하나는 식물 / 토양 침투하기 전에 하루에 물을 침투하여 미디어를 몸으로에서 흙을 피하기 위해 필요합니다. 잠수함 침투 미디어의 토양하지 마십시오. 둘째, 수분을 줄이.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
도움이 의견을 거스 - 절대 안전한 프로토콜 Paja Sijacic과 코트니 Hollender를 공유하기위한 거스와 그림 1, Detlef 위겔의 사진을 : 우리는 pTSO2 구축을위한 Chunxin 왕 감사합니다. Z. L S 실험실에서 연구는 미국 국립 과학 재단 (IOB0616096 및 MCB0744752)에 의해 지원됩니다. ZL는 부분적으로 메릴랜드 농업 실험 역 대학에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 6-벤질아데닌 | Sigma-Aldrich | 852430 | |
| Silwet-77 | Crompton Corp. | 독성, 장갑 착용 필수 | |
| Murashige and Skoog 기본 배지 (MS) | Sigma-Aldrich | M5519 | |
| Gamborg’비타민 용액 1000X | Sigma-Aldrich | G1019 | |
| X-Gluc (5-브로모-4-클로로-3-인돌릴 βD-글루쿠로니드 사이클로헥사민 염 | Biosynth International, Inc | B-7300 | 독성, 빛에 민감하므로 암소 보관 |
| 3M 마이크로포어 테이프 | Fisher Scientific | 19027761 |
참고문헌
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J....
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재인쇄 및 허가
