إزالة الحشرات Puparium: طريقة لفحص العذراء

Abstract

المصدر: Fukutomi، Y.، et al. طرق تحديد فترات العذراء وقياس تصبغ الجناح ذبابة الفاكهة guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

تصف هذه المقالة تقنية لإزالة شادرنية الحشرة مع الحفاظ على الخادرة الداخلية سليمة وبالتالي فهي مناسبة لمزيد من التحقيق. يوضح بروتوكول المثال الإجراء مع ذبابة الفاكهة guttifera. ومع ذلك ، فإن هذه التقنية قابلة للتطبيق على أنواع ذبابة الفاكهة الأخرى.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Fukutomi et al. ، طرق تحديد فترات العذراء وقياس تصبغ الجناح ذبابة الفاكهة guttifera، J. Vis. Exp. (2018).

< p class = "jove_title" >1. إزالة puparium

< strong class = "note" > ملاحظة الشرانق ذبابة الفاكهة مغطاة بهيكل يسمى puparium. حشرة من Muscomorpha (الذباب) لا تسقط بشرة اليرقات عند التشرنق ؛ بدلا من ذلك ، فإنه يقوي البشرة بعد التخليص ، ويستخدمها كغطاء واقي للخادرة ، الشرانق. الخادرة المقيمة داخل الشرانق لها بشرة عذراء حقيقية ، وهي ناعمة وهشة للغاية. قبل أن يحدث العذراء حول P4 (ii) ، يتم ربط الظهارة والشرانق معا ، وبالتالي فإن إزالة الشرانق دون ضرر أمر صعب للغاية. بعد P5 ، تعد إزالة الشرانق أمرا شاقا ، ولكنه مفيد للمراقبة المورفولوجية وتحديد مراحل العذراء. تتم العملية على النحو التالي.

1. ضع قطعة من الشريط على الوجهين على قطعة من المناديل الورقية.
2. ضع خادرة على الجانب البطني للشريط على الوجهين لأعلى (الشكل 1 أ).
3. حدد المسافة بين الجانب الأمامي من الشرانق والخادرة الداخلية. أمسك وقم بإزالة الشرانق حول هذه الفجوة باستخدام الملقط ، وكشف الجانب الأمامي من رأس الخادرة.
4. أدخل طرف الملقط عن طريق تحريكه بالتوازي مع المحور الأمامي الخلفي. ارفع طرف الملقط لكسر الشرانق محليا. كرر هذا الإجراء حتى يصل الكسر إلى الجزء الخلفي من الشرانق. تأكد من تكوين فجوة أيضا بين الساقرة وأرجل العذراء ، وكسر الجانب البطني من الشرانق وتقليل الضرر الذي يلحق بالخادرة الداخلية (الشكل 1 ب).
5. بعد كسر المعدرة قدر الإمكان ، أخرج الخادرة باستخدام فرشاة رسم دقيقة (# 5/0) (الشكل 1 ج).
6. ضع الخادرة على قطعة من المناديل الورقية المبللة ب ddH₂O وتوضع في طبق بتري بلاستيكي (قطر 60 مم × ارتفاع 15 مم). التقط صورا في أسرع وقت ممكن لأن الخادرة المكشوفة ضعيفة وتصبح جافة بسهولة.
    

Results

الشكل 1. رسم توضيحي لإزالة الشرانق.(أ) ضع جانب الخادرة البطني لأعلى على قطعة من الشريط على الوجهين. قم بإزالة الجزء الأمامي من الشرانق. (ب) كسر الشرانق بالملقط من الجانب البطني. (ج) بعد كسر المعدرة ، أخرج الخادرة باستخدام فرشاة الرسم.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ذبابة الفاكهة guttifera ذبابة الفاكهة مركز مخزون الأنواع في جامعة كاليفورنيا في سان دييغو 15130-1971.10 ذبابة الفاكهة guttifera ، نوع من ذبابة الفاكهة المستخدمة في هذه المقالة شريط NICETACK على الوجهين نيتشيبان NW-15SF شريط مزدوج الوجهين لإزالة puparium ملقط دومون # 5 أدوات العلوم الدقيقة 11252-20 ملقط لإزالة puparium فرشاة فان جوخ VISUAL Paint تالينس اليابان GWVR- # 5/0 فرشاة الطلاء لإزالة المعبودية مجهر مجسمة أوليمبوس SZX16 المجهر المجسم للملاحظة المورفولوجية كاميرا رقمية أوليمبوس DSE-330-A كاميرا رقمية للتصوير طبق زراعة الأنسجة القياسي Falcon كورنينج 353002 طبق بتري بلاستيكي (قطر 60 مم × ارتفاع 15 مم)