कीट Puparium हटाने: पुपल जांच के लिए एक विधि

Abstract

स्रोत: फुकुटोमी, वाई, एट अल. पुपल अवधि और ड्रोसोफिला गुटटिफेराके विंग पिगमेंटेशन के माप के लिए विधियां । जे विस एक्सप्रेस। (2018). 

यह लेख अंदर पिल्ला को बरकरार रखते हुए एक कीट के प्यूपरियम को हटाने की तकनीक का वर्णन करता है और इसलिए आगे की जांच के लिए फिट होता है। उदाहरण प्रोटोकॉल ड्रोसोफिला गुटटिफेराके साथ प्रक्रिया को दिखाता है; हालांकि, यह तकनीक अन्य ड्रोसोफिला प्रजातियों पर लागू होती है।

Protocol

यह प्रोटोकॉल फुकुटोमी एट अल से एक अंश है, पुपल अवधि के मंचन के लिए विधियां और ड्रोसोफिला गुटटिफेरा, जे विस एक्सपीके विंग पिगमेंटेशन का मापन। (2018).

1. प्यूपरियम को हटाना

नोट ड्रोसोफिला के प्यूपे को प्यूपरियम नामक संरचना द्वारा कवर किया जाता है। मस्कोमॉर्फा (मक्खियों) की एक कीट पिल्ला पर अपने लार्वा क्यूटिकल को नहीं बहाती है; इसके बजाय, यह एपोलिसिस के बाद क्यूटिकल को कठोर करता है, और इसे प्यूपा, प्यूपरियम के सुरक्षात्मक कवर के रूप में उपयोग करता है। एक प्यूपरियम के अंदर रहने वाले एक प्यूपा में एक सच्चा प्यूपल क्यूटिकल होता है, जो बहुत नरम और नाजुक होता है। इससे पहले कि P4 (ii) के आसपास एपोलिसिस होता है, एपिथेलिया और प्यूपरियम एक साथ जुड़े होते हैं, और इसलिए नुकसान के बिना प्यूपरियम को हटाना बहुत मुश्किल है। P5 के बाद, प्यूपरियम को हटाना श्रमसाध्य है, लेकिन रूपात्मक अवलोकन और पुपल चरणों की परिभाषा के लिए उपयोगी है। प्रक्रिया इस प्रकार की जाती है।

1. कागज तौलिया के एक टुकड़े पर दो तरफा टेप का एक टुकड़ा प्रत्यय।
2. दो तरफा टेप वेंट्रल साइड अप(चित्रा 1A)पर एक पिल्ला रखें।
3. प्यूपरियम और आंतरिक पिल्ला के पूर्वकाल पक्ष के बीच की जगह का पता लगाएं। संदंश का उपयोग करके इस अंतर के चारों ओर प्यूपरियम को पकड़ें और हटा दें, और पिल्ला के सिर के पूर्वकाल पक्ष को बेनकाब करें।
4. इसे पूर्वकाल-पीछे की धुरी के समानांतर ले जाकर संदंश की नोक डालें। स्थानीय रूप से प्यूपरियम को तोड़ने के लिए संदंश की नोक उठाएं। इस क्रिया को तब तक दोहराएं जब तक टूटना प्यूपरियम के पीछे के हिस्से तक न पहुंच जाए। सुनिश्चित करें कि प्यूपरियम और प्यूपल पैरों के बीच एक अंतर भी बनता है, और प्यूपरियम के वेंट्रल साइड को तोड़कर आंतरिक पिल्ला(चित्रा 1B)को नुकसान को कम करता है।
5. जितना संभव हो पिल्ला तोड़ने के बाद, एक ठीक तूलिका (#5/0)(चित्रा 1C)का उपयोग कर पिल्ला बाहर ले लो ।
6. पिल्ला को टिशू पेपर के एक टुकड़े पर रखें जिसे डीडीएच₂ओ के साथ गीला किया गया है और एक प्लास्टिक पेट्री डिश (व्यास 60 मिमी x ऊंचाई 15 मिमी) में रखा गया है। जितनी जल्दी हो सके तस्वीरें लें क्योंकि उजागर पिल्ला कमजोर है और आसानी से सूखा हो जाता है।
    

Results

चित्रा 1. प्यूपरियम को हटाने का चित्रण। (क) एक पिल्ला वेंट्रल साइड को दो तरफा टेप के टुकड़े पर रखें । प्यूपरियम के पूर्वकाल के हिस्से को हटा दें। (ख) वेंट्रल साइड से संदंश के साथ प्यूपरियम तोड़ें । (ग) प्यूपरियम तोड़ने के बाद तूलिका का इस्तेमाल करते हुए पिल्ला निकाल लें ।

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Drosophila guttifera	The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego	15130-1971.10	Drosophila guttifera,  a fruit fly species used in this article
NICETACK double sided tape	Nichiban	NW-15SF	Double sided tape,   for removing puparium
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11252-20	Forceps,  for removing puparium
Van Gogh VISUAL Paint brush	Talens Japan	GWVR-#5/0	Paint brush,  for removing puparium
Stereomicroscope	Olympus	SZX16	Stereomicroscope,  for morphological observation
Digital camera	Olympus	DSE-330-A	Digital camera,  for imaging
Falcon standard tissue culture dish	Corning	353002	Plastic Petri dish (diameter 60 mm x height 15 mm)