Saggio di arrampicata su mosca: un metodo per testare la locomozione generale nella Drosophila melanogaster

Overview

Questo video descrive un metodo semplice per quantificare la locomozione della mosca e mostra il saggio di arrampicata eseguito.  Il saggio di arrampicata su mosca è un test generale della funzione motoria che si basa su una risposta geotassica negativa.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster,J. Vis. Exp. 

1. Saggio di arrampicata (adattato da Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Convalida il saggio di arrampicata. In questo studio, testare il saggio di arrampicata basato sulla metodologia precedentemente descritta da Ali et al., utilizzando Elav^C155>UAS-Tau^R406W (che mostra tassi di passaggio di arrampicata più bassi) e Elav^C155>UAS-GFP (controllo) ed Elav^C155>UAS-mCherry (controllo) vola.
2. Capovolgere le mosche in una camera di prova, una linea alla volta (non utilizzare anestesia di CO₂₎ e consentire loro di recuperare per 5 minuti. Se il test viene eseguito in giorni diversi, eseguire il test alla stessa ora del giorno. In questo studio, tutti i saggi di arrampicata sono stati eseguiti nel pomeriggio per controllare gli effetti circadiani sulla locomozione.
   NOTA Evitare di esporre le mosche alla luce solare diretta durante i test; questo interferirà con la loro capacità di arrampicarsi.
3. Toccare forzatamente la camera (marcata lateralmente verso il basso) su un tappetino del mouse posizionato su una superficie solida 3 volte in modo che tutte le mosche inizino il saggio nella parte inferiore. Osserva la locomozione della mosca per un periodo di 10 s.
4. Registra il numero di mosche che raggiungono o superano la linea di 5 cm entro questo periodo, così come il numero totale di mosche testate. Ripetere il protocollo, in attesa di 1 minuto tra ogni prova, per un minimo di 3 repliche di prova per riga.
   NOTA Nel presente studio, ogni fiala conteneva da 2 a 19 mosche per lo screening iniziale (mosche maschili) e tra 6 e 21 mosche per l'analisi della carenza mutante di linee femminili incrociate.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package