Fly Восхождение Анализ: Метод для проверки общего передвижения в Drosophila melanogaster

Overview

Это видео описывает простой метод количественно летать передвижения и показывает восхождение анализ выполняется.  Летать восхождение анализ является общим испытанием двигательной функции, которая опирается на отрицательный ответ геотаксиса.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Gevedon и др., In Vivo Forward Genetic Screen для выявления новых нейропротекторных генов в Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Восхождение анализа (Адаптировано от Али и др.., J. Vis. Exp. (2011))

1. Проверить альпинистский анализ. В этом исследовании, проверить альпинистский анализ на основе ранее описанной методологии Али и др., используя Elav^C155йgt;UAS-Tau^R406W (экспонирование более низкие темпы восхождения проход) и Elav^C155
2. Переверните мух в испытательной камере, по одной линии за один раз (не используйте CO₂ анестезии) и дайте им восстановиться в течение 5 минут. Если тестирование проводится в разные дни, выполните анализ в одно и то же время дня. В этом исследовании, все альпинистские анализы были выполнены во второй половине дня для контроля циркадного воздействия на передвижение.
   ПРИМЕЧАНИЕ Избегайте подвергая мух прямых солнечных лучей при тестировании; это будет мешать их способности подниматься.
3. Принудительно нажмите на камеру (отмеченную стороной вниз) на коврик для мыши, помещенный на твердую поверхность 3 раза, чтобы все мухи начали анализ внизу. Наблюдайте за движением мух в течение 10 с.
4. Замещать количество мух, которые достигают или проходят линию 5 см в течение этого времени, а также общее количество проверенных мух. Повторите протокол, ожидая 1 мин между каждой пробной версией, как минимум для 3 пробных репликаций на строку.
   ПРИМЕЧАНИЕ В настоящем исследовании, каждый флакон содержится между 2 и 19 мух для первоначального скрининга (мужские мухи) и между 6 и 21 мух для мутантного анализа дефицита пересек женских линий.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package