Fly Climbing Assay: En metod för att testa allmän rörelse i Drosophila melanogaster

Overview

Den här videon beskriver en enkel metod för att kvantifiera flugrörelse och visar den klättringsanalys som utförts.  Flugklättringsanalysen är ett allmänt test av motorisk funktion som förlitar sig på ett negativt geotaxissvar.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen för att identifiera nya neuroprotektiva gener i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Klätteranalys (Anpassad från Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Validera klättringsanalysen. I denna studie, testa klättringsanalysen baserat på tidigare beskriven metodik av Ali et al., med Hjälp av Elav^C155>UAS-Tau^R406W (uppvisar lägre klättringspass) och Elav^C155>UAS-GFP (kontroll) och Elav^C155> UAS-mCherry (kontroll) flugor.
2. Vänd flugorna i en testkammare, en linje i taget (använd inte CO₂ anestesi) och låt dem återhämta sig i 5 minuter. Om testning görs på olika dagar, utför analysen samtidigt på dagen. I denna studie utfördes alla klättringsanalyser på eftermiddagen för att kontrollera för dygnsrytmeffekter på rörelse.
   ANMÄRKNING Undvik att utsätta flugorna för direkt solljus vid testning; detta kommer att störa deras förmåga att klättra.
3. Knacka med våld kammaren (markerad sida ner) på en musmatta placerad på en fast yta 3 gånger så att alla flugor börjar analysen längst ner. Observera flugrörelse under en period av 10 s.
4. Registrera antalet flugor som når eller passerar 5 cm-linjen inom denna tid, liksom det totala antalet testade flugor. Upprepa protokollet, som väntar 1 minut mellan varje provperiod, för minst 3 utvärderings replikat per rad.
   ANMÄRKNING I den aktuella studien innehöll varje injektionsflaska mellan 2 och 19 flugor för den första screeningen (hanflugor) och mellan 6 och 21 flugor för mutantbristanalys av korsade kvinnliga linjer.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package