Sinek Tırmanma Testi: Drosophila melanogaster'da Genel Locomotion'ı Test Etmek İçin Bir Yöntem

Overview

Bu video, sinek locomotion'ını ölçmek için basit bir yöntemi açıklar ve gerçekleştirilen tırmanma testini gösterir.  Sinek tırmanma testi, negatif jeotaksi yanıtına dayanan genel bir motor fonksiyon testidir.

Protocol

Bu protokol, Drosophila melanogaster,J. Vis. Exp. (2019)'daki Yeni Nöroprotektif Genleri Tanımlamak için Gevedon ve ark.,In Vivo Forward Genetic Screen'den bir alıntıdır. 

1. Tırmanma Tahlilleri (Ali ve ark., J. Vis. Exp'den uyarlanmıştır. (2011))

1. Tırmanma testini doğrulayın. Bu çalışmada, Elav^C155>UAS-Tau^R406W (daha düşük tırmanma geçiş oranları sergileyen) ve Elav C155 >UAS-GFP (kontrol) ve Elav^C155>UAS-mCherry (kontrol) sineklerini kullanarak Ali ve arkadaşları tarafından daha önce açıklanan metodolojiye dayanarak tırmanma testini test edin.
2. Sinekleri bir test odasına çevirin, her seferinde bir satır (CO₂ anestezisi kullanmayın) ve 5 dakika boyunca iyileşmelerine izin verin. Test farklı günlerde yapılırsa, testi günün aynı saatinde gerçekleştirin. Bu çalışmada, sirkadiyen etkilerin lokomotion üzerindeki etkilerini kontrol etmek için öğleden sonra tüm tırmanma tahlilleri gerçekleştirilmiştir.
   NOT Test ederken sinekleri doğrudan güneş ışığına maruz kalmaktan kaçının; bu, tırmanma yeteneklerine engel olacaktır.
3. Odayı (işaretli tarafı aşağı) katı bir yüzeye yerleştirilmiş bir fare alt kısmına 3 kez zorla dokunun, böylece tüm sinekler teste altta başlar. 10 s'lik bir süre boyunca sinek locomotion gözlemleyin.
4. Bu süre içinde 5 cm çizgisine ulaşan veya geçen sinek sayısını ve test edilen toplam sinek sayısını kaydedin. Satır başına en az 3 deneme çoğaltması için her deneme arasında 1 dakika bekleyerek protokolü yineleyin.
   NOT Bu çalışmada, her şişe ilk tarama için 2 ila 19 sinek (erkek sinekler) ve çapraz kadın hatlarının mutant eksikliği analizi için 6 ila 21 sinek içeriyordu.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package