Bu protokol, Gevedon ve ark., Drosophila melanogaster'deki Yeni Nöroprotektif Genleri Tanımlamak için In Vivo İleri Genetik Ekran, J. Vis. Uzm.(2019).
1. Tırmanma Testi (Ali ve ark., J. Vis. Exp. (2011)
<ol>
	<li>Tırmanma testini doğrulayın. Bu çalışmada, Ali ve arkadaşları tarafından daha önce açıklanan metodolojiye dayalı tırmanma testi, ElavC155>UAS-TauR406W (daha düşük tırmanma geçiş oranları sergileyen) ve ElavC155>UAS-GFP (kontrol) ve ElavC155>UAS-mCherry (kontrol) sinekleri kullanılarak test edilmiştir.</li>
	<li>Sinekleri her seferinde bir satır olacak şekilde bir test odasına çevirin (CO2 anestezisi kullanmayın) ve 5 dakika boyunca iyileşmelerine izin verin. Test farklı günlerde yapılıyorsa, testi günün aynı saatinde yapın. Bu çalışmada, sirkadiyen hareket üzerindeki etkileri kontrol etmek için tüm tırmanma testleri öğleden sonra yapıldı. 
	NOTE Test ederken sinekleri doğrudan güneş ışığına maruz bırakmaktan kaçının; Bu, tırmanma yeteneklerine müdahale edecektir.</li>
	<li>Hazneyi (işaretli tarafı aşağı bakacak şekilde) katı bir yüzeye yerleştirilmiş bir mouse pad'e 3 kez zorla vurun, böylece tüm sinekler teste alttan başlar. 10 saniyelik bir süre boyunca sinek hareketini gözlemleyin.</li>
	<li>Bu süre içinde 5 cm'lik çizgiye ulaşan veya geçen sinek sayısını ve test edilen toplam sinek sayısını kaydedin. Satır başına en az 3 deneme tekrarı için her deneme arasında 1 dakika bekleyerek protokolü tekrarlayın. 
	NOT Bu çalışmada, her flakon, ilk tarama için 2 ila 19 sinek (erkek sinekler) ve çapraz dişi hatların mutant eksiklik analizi için 6 ila 21 sinek içeriyordu.</li>
</ol>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1448px;" width="1449">
	<tbody>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;width:572px;">VWR® Drosophila flakon; Dar</td>
			<td style="width:310px;">VWR</td>
			<td style="width:147px;">75813-160</td>
			<td style="width:420px;"></td>
		</tr>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;">VWR® Genel Amaçlı Laboratuvar Etiketleme Bandı</td>
			<td>VWR (VWR)</td>
			<td>89097-912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Standart mouse pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;">stereoskop</td>
			<td>Motic (Hareketli Müzik)</td>
			<td></td>
			<td>Modeli: SMZ-168</td>
		</tr>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Drosophila Kuluçka Makinesi</td>
			<td>VWR (VWR)</td>
			<td>89510-750</td> arası
			<td></td>
		</tr>
		<tr yükseklik="19">
			<td height="19" style="height:20px;">R yazılım paketi</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sinek tırmanma deneyi: drosophila melanogaster'de genel hareketi test etmek İçin bir yöntem

Kaynak: Gevedon, O., et al. <a href="https://www.jove.com/video/59720/in-vivo-forward-genetic-screen-to-identify-novel-neuroprotective">Drosophila melanogaster'de Yeni Nöroprotektif Genleri Tanımlamak için İn Vivo İleri Genetik Ekran</a>. J. Vis. Uzm. (2019).
Bu video, sinek hareketini ölçmek için basit bir yöntemi açıklar ve gerçekleştirilen tırmanma testini gösterir. Sinek tırmanma testi, negatif bir jeotaksi tepkisine dayanan genel bir motor fonksiyon testidir.

Sinek Tırmanma Deneyi: Drosophila melanogaster'de Genel Hareketi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Kaynak: Gevedon, O., et al. Drosophila melanogaster'deki yeni nöroprotektif genleri tanımlamak için in vivo ileri genetik tarama. J. Vis. Uzm. (2019).
Bu...

-İlk olarak, belirli sayıda yetişkin Drosophila edinin. Tırmanma testi için test odası, birbirine bantlanmış iki şişeden oluşur. Bu şişelerden biri bir çizgi ile işaretlenmelidir. Tırmanma davranışını bozabilecek karbondioksit anestezisi olmadan, belirli sayıda sineği test odasına aktarın. Sineklerin önceden belirlenmiş bir süre boyunca iyileşmesine izin verin. Haznenin işaretli tarafı aşağıdayken, hazneyi sağlam bir yüzeye yerleştirilmiş bir mouse pad'e sıkıca vurun. Bu, sinekleri odanın dibine zorlar. Tırmanma testi, Drosophila'nın yerçekimine karşı yukarı doğru tırmanma eğiliminden yararlanır, bu davranış negatif jeotaksidir. Deneme sırasında, sinekler doğrudan güneş ışığına maruz bırakılmamalıdır, çünkü sinekler fototaksi davranışı veya ışık uyaranına tepki olarak hareket gösterebilir. Çizgiye ulaşan veya çizgiyi geçen sineklerin sayısını kaydedin. Daha sonra bu sayıyı test edilen toplam sinek sayısına bölerek yüzde geçiş oranını elde edin. Denemeyi tekrarlamadan önce sineklerin iyileşmesine izin verin. Örnekte, kimyasal mutajenezden sonra Drosophila motor fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılan bir sinek tırmanma testini gözlemleyeceğiz. -Başlamak için, ikinci kromozoma eşlenmiş ENU mutajenize Drosophila mutantları koleksiyonuna ait hatlardan homozigot sinekleri toplayın. 10 ila 12 günlük sinekleri anestezi olmadan bir test odasına çevirin, her seferinde bir satır ve beş dakika boyunca iyileşmelerine izin verin. Beş santimetrelik çizgi aşağı bakacak şekilde işaretlenmiş durumdayken, tüm sineklerin teste alttan başlaması için katı bir yüzeye yerleştirilmiş bir fare altlığına hazneye üç kez zorla vurun. 10 saniyelik bir süre boyunca sinek hareketini gözlemleyin. Bu süre içinde beş santimetre çizgisine ulaşan veya geçen sinek sayısını ve test edilen toplam sinek sayısını kaydedin. İkinci denemeye başlamadan önce bir dakika bekleyin. Satır başına en az üç deneme yinelemesini yineleyin.

fly-climbing-assay-method-to-test-general-locomotion-drosophila

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Drosophila melanogaster (fruit fly)

Adult

Fly Climbing Assay: A Method to Test General Locomotion in Drosophila melanogaster

13.3K Views. -First, obtain a set number of adult Drosophila. The testing chamber for the climbing assay is composed 

Sinek Tırmanma Deneyi: Drosophila melanogaster'de Genel Hareketi Test Etmek İçin Bir Yöntem

In This Article

Abstract

Protocol

Materials

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila flakon; Dar	VWR	75813-160
VWR® Genel Amaçlı Laboratuvar Etiketleme Bandı	VWR (VWR)	89097-912
Standart mouse pad
stereoskop	Motic (Hareketli Müzik)		Modeli: SMZ-168
Drosophila Kuluçka Makinesi	VWR (VWR)	89510-750
R yazılım paketi