دروسوفيلا تقاطع العصبية والعضلية (NMJ) القياس الكمي: طريقة لتقييم مورفولوجيا متشابك ووظيفة

Published: April 30, 2023

Abstract

المصدر: كاستيلس-نوسبو، أ. وآخرون، خوارزميتان للقياس الكمي عالي الإنتاجية ومتعدد البارامترية لمورفولوجيا تقاطع الأعصاب والعضلية Drosophila. ج. فيس إكسب. (2017).

يتم استخدام التقاطع العصبي العضلي Drosophila (NMJ) كنموذج لدراسة مورفولوجيا ووظيفة نقاط الاشتباك العصبي. يصف هذا الفيديو السمات الهامة التي يحددها الباحثون لتوصيف NMJ. يوضح بروتوكول المثال برنامجا قادرا على إجراء القياس الكمي تلقائيا.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Castells-Nobau وآخرون.  (2017). 1. متطلبات قبل معالجة الصور قم بإجراء تحضيرات كتاب Drosophila المفتوحة ليرقات التجول في النجوم الثالثة (L3) ، كما هو موضح سابقا. المشتركة المناعية Drosophila محطات NMJ باستخدام مزيج من علامتين: DLG-1 أو هرب …

Representative Results

الشكل 1: أمثلة على نتائج تجزئة الماكرو غير الملائمة. نتائج الصور بعد تشغيل”Drosophila NMJ مورفومترس” أو”Drosophila NMJ بوتون مورفومترس”. لا يتم تضمين أجزاء من محطة متشابك في المخطط الأصفر (A). يتم تضمين أجزاء من الخلفية في محطة متشا?…

Materials

Immunostaining Dilution
Mouse anti-discs large 1 Developmental Studies Hybridoma Bank AFFN-DLG1-4D6 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidase Jackson IR 323-005-021 1/500
Rabbit anti-Synaptotagmin Gift from Hugo Bellen Jan-00
Mouse anti-Cysteine string protein Developmental Studies Hybridoma Bank DCSP-1(ab49) 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-Bruchpilot Developmental Studies Hybridoma Bank nc82 Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 Life technologies A11029 1/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 Life technologies A11011 1/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit ThermoFisher Z25006
ProLong Gold Antifade Mountant ThermoFisher P36930
Equipment
Confocal microscope or fluorescence microscope Leica SP5
Zeiss Axio imager
Computer Mac or Pc
Software
FIJI

Play Video

Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).

View Video