Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Kvantifisering: En metode for å vurdere synaptisk morfologi og funksjon
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Castells-Nobau, A., et al. To algoritmer for høy gjennomstrømning og multiparametrisk kvantifisering av Drosophila Neuromuscular Junction Morphology. J. Vis. Utt. (2017).
Drosophila neuromuscular junction (NMJ) brukes som modell for å studere morfologi og funksjon av synapser. Denne videoen beskriver viktige trekk som forskere kvantifiserer for å karakterisere NMJ. Eksempelprotokollen demonstrerer en programvare som kan utføre kvantifiseringen automatisk.
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput og Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Krav før bildebehandling Utfør Drosophila åpne bokpreparater av tredje instar vandrende larver (L3), som tidligere beskrevet. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminaler ved hjelp av en kombinasjon av to markører: Dlg-1 eller Hrp …
Representative Results
Figur 1: Eksempler på resultater av upassende makrosegmentering. Resultatbilder etter å ha kjørt”Drosophila NMJ Morphometrics” eller”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Deler av synaptisk terminal er ikke inkludert i det gule omrisset (A). Deler av bakgrunnen er inkludert i synaptisk terminal av den gule omrisset (B). Blå skjelettlinje strekker seg utover synaptisk…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).