Lesione neurale indotta da laser a due fotoni: un metodo per osservare la degenerazione e la rigenerazione degli assoni nelle larve di Drosophila

Abstract

Source: Li, D., et al. Un modello di lesione in vivo di Drosophila per lo studio della neurorigenerazione nel sistema nervoso periferico e centrale. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive l'ablazione laser a due fotoni degli assoni in una larva di Drosophila melanogaster e un protocollo di esempio per indurre lesioni e visualizzare il sito della lesione.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Li et al., A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System, J. Vis. Exp. (2018).

1. Lesioni a due fotoni e imaging confocale

1. Configurazione del microscopio
   NOTA: Per questo esperimento è stato utilizzato un microscopio a scansione laser confocale con un laser a due fotoni, ma saranno sufficienti anche altri sistemi con una configurazione equivalente. Il laser a due fotoni (930 nm) è stato utilizzato per l'erogazione di lesioni e un laser ad argon (488 nm) è stato utilizz....

Results

Figura 1: La rigenerazione dell'assone del neurone Da nella periferia mostra una specificità di classe. (A e B) Disegno schematico che mostra la posizione delle larve. (C) Disegno schematico di neuroni da di classe III. (D) Gli assoni dei neuroni da ddaF di classe III, marcati con 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+, non riescono a ricrescere. (E) Di.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Etere dietilico, reagente ACS, anidro	Acros Organics	AC615080010
Olio alocarbonico 27	Genesee Scientifico	59-133
Acido propionico	J.T.Baker	U33007
Copri occhiali: Rettangoli	Fisher Scientifico	12-544-D	50 mm X 22 mm
Microscopio a scansione laser Zeiss LSM 880	Zeiss
Software Zen	Zeiss
Camaleonte Ultra II	coerente