Traitement des pattes d’insectes pour la microscopie par fluorescence : une méthode pour préserver les structures neuromusculaires pour l’imagerie

Abstract

Source : Guan, W., et autres visualisent des axones de neurone moteur de jambe de Drosophila par la cuticule adulte. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit une méthode pour disséquer, fixer et monter la jambe adulte de Drosophila tout en préservant sa neuromusculature intacte pour l’analyse d’imagerie.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Guan et coll.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Dissection et fixation des jambes Prenez une plaque en verre multi-puits et remplissez le nombre approprié de puits avec 70 % d’éthanol. Ajouter 15-20 mouches anesthésiées au CO 2 (de sexe ou de tout âge) à chaque puits et à l’aide d’une brosse, tamponner doucement les mouches dans la solutiond’étha…

Representative Results

Figure 1 : Procédure de montage des jambes sur des toboggans au microscope. S’il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium