Traitement de pattes d’insectes pour la microscopie à fluorescence : une méthode pour préserver les structures neuromusculaires pour l’imagerie

Abstract

Source : Guan, W., et al. Visualiser les axones des motoneurones de la jambe de la drosophile à travers la cuticule adulte. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit une méthode pour disséquer, fixer et monter la patte adulte de la drosophile tout en préservant sa neuromusculature intacte pour l’analyse d’imagerie.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp.(2018).

1. Dissection et fixation de la jambe

1. Prenez une plaque multi-puits en verre et remplissez le nombre approprié de puits avec de l’éthanol à 70 %. Ajoutez 15 à 20 mouches anesthésiées au CO₂ (des deux sexes et de tout âge) dans chaque puits et, à l’aide d’un pinceau, tamponnez doucement les mouches dans la solution d’éthanol jusqu’à ce que les mouches soient complètement immergées.
   REMARQUE : Cette étape consiste à supprime....

Results

Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Éthanol absolu	pêcheur	E/6550DF/17	Qualité absolue de réactif analytique
détergent tensioactif non ionique	Sigma-Aldrich	Réf. T8787	Triton X-100, pour la biologie moléculaire
Pinces fines	Sigma-Aldrich	Réf. F6521	Pince de bijoutier, Dumont n° 5
Plaque multi-puits en verre	Sciences de la microscopie électronique	Référence 71563-01	9 cavités en Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermopêcheur	Référence 28908	Pierc 16 % Formaldéhyde (p/v), sans méthanol
glycérol	Bioréactifs Fisher	BP 229-1	Glycérol (biologie moléculaire)
Entretoises	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, quatre puits, volume de travail d’environ 12 μL par puits, 7 mm de diamètre, 0,18 mm de profondeur
Lamelles carrées de 22 mm x 22 mm	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	N° 1,5-0,16 à 0,19 mm d’épaisseur
Support de montage	Laboratoires Vecteurs	H-1000	Vectashield Antifade Medium de montage