Overview
Este vídeo descreve como rastrear moscas livremente andando para avaliar sua capacidade geral de locomoção. O protocolo em destaque demonstra a configuração e análise de dados do ensaio usando o software de rastreamento de vídeo.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Sun and Chen, Um Novo Método para Modelar Encefalopatia Traumática Crônica em Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).
1. Rastreamento de movimento assistido por vídeo
- Encha uma placa de Petri de 6 cm de diâmetro com elastômero de silício transparente para fazer a arena de rastreamento. Deixe um espaço de 3 mm entre o silício e a tampa do prato para permitir que as moscas andem livremente, mas não voem.
- Anestesiar quatro moscas do grupo falso ou tratado cada vez e colocá-los na arena. Deixe as moscas a 22 °C por 1h.
- Posicione uma câmera CCD (Charge-Acoplado) acima das arenas e grave por 5 minutos.
- Analise as trajetórias de movimento registradas usando o software Ctrax (disponível livremente na Caltech). Exporte os dados rastreados em uma linguagem de programação (por exemplo, formato compatível com Matlab) e analise os dados com base na distância peroldada por quadro. Calcule a distância média de caminhada para cada mosca e combine-a com todas as outras moscas/grupo registradas para obter uma distância média cumulativa percorrida pela população de arquivos no mesmo grupo.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
| Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
| Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
| Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
| Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
| CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
| Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
| MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |
