Rastreando moscas que andam livremente: um método para avaliar a locomoção em Drosophila

Abstract

Fonte: Sun, M. e Chen, L. L. Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve como rastrear moscas que andam livremente para avaliar sua capacidade geral de locomoção. O protocolo apresentado demonstra a configuração do ensaio e a análise de dados usando software de rastreamento de vídeo.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Sun e Chen, Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).

1. Rastreamento de movimento assistido por vídeo

1. Encha uma placa de Petri de 6 cm de diâmetro com elastômero de silicone transparente para fazer a arena de rastreamento. Deixe um espaço de 3 mm entre o silicone e a tampa da loiça para permitir que as moscas andem livremente, mas não voem.
2. Anestesie quatro moscas do grupo simulado ou tratado de cada vez e coloque-as na arena. Deixar as moscas a 22 °C durante 1 h.
3. Posicione uma câmera de dispositivo de carga acoplada (CCD) acima das arenas e grave por 5 min.
4. Analise as trajetórias de movimento registradas usando o software Ctrax (disponível gratuitamente na Caltech). Exporte os dados rastreados em um formato compatível com linguagem de programação (por exemplo, Matlab) e analise os dados com base na distância percorrida por quadro. Calcule a distância média percorrida por cada mosca e combine-a com todas as outras moscas/grupo registadas para obter uma distância média cumulativa percorrida pela população de ficheiros do mesmo grupo.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Placas de Petri de 60 mm	Fisher Científico	FB0875713A	Usado como arenas de rastreamento
Regulador de fluxo	Genesee Científico	59-122WC
Pincel fino	Genesee Científico	Rolamento 59-204
Flypad	Genesee Científico	Rolamento 59-114
Elastômero de silicone Sylgard	Dow Corning	4019862
Câmera CCD	Microsoft	HD-5000
Rastreador de moscas ambulantes Ctrax	Caltech	Ctrax 0.2.11
Caixa de ferramentas de processamento de imagens MATLAB	LABORATÓRIO MATLAB	R2015b