Cuticle Disruption: En metode for å samle hemolymfe fra Drosophila Larver

Abstract

Kilde: Reimels, T. A. og Pfleger, C.M. Metoder for å undersøke lymfekjertel og hemocytter i Drosophila Larver. J. Vis. Utt. (2016).

Drosophila hemolymph fungerer som både blod og interstitiell væske, sirkulerer gjennom hele kroppen under larven og voksenstadiene. Denne videoen beskriver en protokoll for å samle larval hemolymfe for å kvantifisere de sirkulerende cellene.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Reimels og Pfleger, Metoder for å undersøke lymfekjertel og hemocytter i Drosophila Larver, J. Vis. Exp. (2016). 1. Sirkulerende hemocyttkonsentrasjon For å oppnå larver av omtrent samme utviklingsstadium for denne analysen, begrens eggsamlingen ved å la kvinner legge egg i en fast tidsperiode på 2 – 6 timer. Samle larver i dissekering av tallerkenbrønner fylt med 1x fosfatbufret saltvann (PBS). For hver …

Materials

PBS tablets	MP Biomedicals	2810305
dissecting dish	Corning	7220-85
microcentrifuge tube	Denville	C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit	Krayden (distributed through Fisher)	NC9644388 (Fisher catalog number)	Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope	Morrell Instruments (Nikon distributor)	mna42000, mma36300	Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe	VWR	82003-820
forceps	Electron Microscopy Sciences	72700-DZ
p200 pipette	Eppendorf	3120000054
Countess Automated Cell Counter	Invitrogen	C10227
Countess cell counting chamber slides	Invitrogen	C10283
hemocytometer	Hausser Scientific	3200
trypan blue stain	Life Technologies	T10282