Single Worm PCR: een methode om genomisch DNA te extraheren en te versterken

In This Article

Abstract

Bron: Prior, H., et al. Een snelle en facile pijpleiding voor het genereren van genomische punt mutanten in C. elegans met behulp van CRISPR / Cas9 Ribonucleoproteïnen. J.Vis. Exp. (2018).

Deze video beschrijft een techniek om een enkel nematode snel te screenen op een genetische marker door PCR-screening. In het voorbeeldprotocol screenen we op CRISPR-gebaseerde genoombewerking.

Protocol

Het volgende protocol is een uittreksel uit Prior et al, A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018).

Single Worm PCR en Genotypering

Breng na 1 - 2 dagen leggen de F₁s over in individuele PCR-stripbuisdoppen met 7 μL wormlysisbuffer met behulp van een wormpluk(tabel 1, figuur 1D,dag 4 - 5).
Centrifugeer PCR-buizen op maximale snelheid gedurende 1 minuut ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

figure-results-1
Figuur 1. CRISPR-Cas9 engineering van deC. eleganssod-1 locus. (A) Schematische illustratie die de exon-intronstructuur van de zode-1 locus in C. elegans afschildert. De rode balk geeft de locatie van G93 in exon 3 aan. De primer paar set wordt opgemerkt door de rode pijlen (F1-R1). (B) Sequentie uitlijning van.......