Overview
هنا ، نقدم مقايسة لقياس SWIP ، وهو النمط الظاهري السلوكي ل C. elegans الذي يحدث أثناء الحركة القوية مثل السباحة. يناقش بروتوكول المثال كلا من نهج التحليل اليدوي والآلي.
Protocol
البروتوكول التالي هو مقتطف من كودومالا وآخرون، الشلل الناجم عن السباحة لتقييم إشارات الدوبامين في كاينورهابديتس إيليغانس، J. Vis. Exp. (2019).
SWIP
ملاحظة: نحن نصف الطريقة اليدوية لتقييم SWIP في الديدان البرية المعالجة ب AMPH. كما نناقش بإيجاز تتبع الديدان والمزيد من التحليل لحركية الديدان باستخدام جهاز تعقب دودة آلي وبرنامج تتبع سبق أن وصفه هارداواي وآخرون.
-
الطريقة اليدوية لاختبار SWIP
- Aliquot 40 ميكرولتر من 200 mOsm / L السكروز الحل إما مع أو بدون 0.5 MM AMPH في لوحة بقعة زجاجية. تحت مجسمة، واختيار 8-10 الديدان مرحلة أواخر L4 مع اختيار رمش أو البلاتين وغمر اختيار في لوحة تحتوي على الحل حتى الديدان تتحرك قبالة اختيار والسباحة في الحل. لاحظ عدد الديدان التي تم انتقاؤها في البئر ، وابدأ الموقت ، ولاحظ وسجل عدد الديدان التي تعرض SWIP في كل علامة دقيقة.
- نسخ البيانات الخام في جدول بيانات وحساب النسبة المئوية من الديدان مشلولة عن طريق تقسيم عدد الديدان مشلولة في كل دقيقة من قبل العدد الإجمالي للديدان اختبارها في جميع أنحاء المقايسة وتتكاثر بنسبة 100. نسخ قيم النسبة المئوية إلى أي رسم بياني وبرنامج إحصائي ورسم البيانات بقيم النسبة المئوية على محور Y والوقت على محور X باستخدام تنسيق الرسم البياني XY.
- إجراء ANOVA ثنائية الاتجاه متبوعة بتحليل ما بعد مخصص (على سبيل المثال، Bonferroni بعد الاختبار) لاختبار الأهمية الإحصائية بين مجموعات التحكم و AMPH ووقت العلاج.
-
التحليل الآلي ل SWIP
- إجراء تحليل تلقائي على دودة واحدة في كل مرة. ويرد وصف بروتوكول لإعداد الكاميرا ، والبرمجيات تعقب دودة والسيناريو لتشغيل تحليل تتبع البرمجيات بالتفصيل في هارداواي وآخرون.
- لفترة وجيزة، وضع واحد في وقت متأخر L4 المرحلة hermaphrodite في لوحة بقعة الزجاج باستخدام اختيار رمش، كما هو موضح في الطريقة اليدوية في القسم 1.1.2. تسجيل أشرطة الفيديو السباحة من دودة واحدة في ذلك الوقت واستخدام برنامج تعقب دودة لحساب وتيرة الانحناءات الجسم.
- اتبع البرنامج النصي المزود ببرنامج التتبع للحصول على تردد سحق الدودة وتوليد خرائط حرارية من بيانات سحق الدودة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Amphetamine | Sigma | 51-63-8 | |
| Depression glass spot plate | Corning | Corning, Inc. 722085 | |
| Eye lash | |||
| Graphing and statistical software | Prism | Graphpad 5 | |
| Osmometer | Advanced Instruments, Inc | Model 3320 | |
| Spreadsheet | MS office | Microsoft Excel | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Model tlb3. 1 stemi2000 | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | RB=S5016 | |
| Superglue | Loctite | 1647358 .14 oz. | |
| SwimR sofware | 10.18129/B9.bioc.SwimR | ||
| Tracker 2 | Worm Tracker 2.0 | www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/ | |
| Video recording software | Virtualdub | http://www.virtualdub.org/ |
