Overview
여기서는 수영과 같은 활발한 운동 중에 발생하는 C. elegans의 행동 표현형인 SWIP를 측정하는 분석서를 소개합니다. 예제 프로토콜은 수동 및 자동화된 분석 접근 방식을 모두 설명합니다.
Protocol
다음 프로토콜은 Kudumala 외에서 발췌,수영 유도 마비 Caenorhabditis elegans에서도파민 신호 평가, J. Vis. Exp. (2019).
스와이프
참고: AMPH로 처리된 야생형 웜에서 SWIP를 평가하는 수동 방법을 설명합니다. 또한 웜 추적 및 자동화된 웜 트래커및 Hardaway 등에서 이전에 설명한 추적 소프트웨어를 사용하여 웜 역학의 추가 분석에 대해 간략하게 논의합니다.
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SWIP에 대해 테스트하는 수동 방법
- 알리쿼트 40 μL 의 200 mOsm/L 자당 용액의 유리 반점 플레이트에 0.5 mMM AMPH의 유무에 관계없이. 스테레오 스코프에서 속눈썹 이나 백금 선택으로 8-10 후반 L4 단계 웜을 선택하고 벌레가 픽에서 이동하고 용액으로 수영 할 때까지 용액이 들어있는 접시에 픽을 잠급합니다. 우물에 뽑힌 웜의 수를 기록하고, 타이머를 시작하고, 각 분 마다 SWIP를 나타내는 웜 수를 관찰하고 기록합니다.
- 원시 데이터를 스프레드시트에 복사하고 분석 전반에 걸쳐 테스트된 총 웜 수로 매 분마다 마비된 웜 수를 나누어 마비된 웜의 백분율을 계산합니다. 백분율 값을 그래프 및 통계 소프트웨어에 복사하고 XY 그래프 형식을 사용하여 Y 축의 백분율 값과 X 축의 시간으로 데이터를 플롯합니다.
- 대조군, AMPH 그룹 및 치료 시간 간의 통계적 유의를 테스트하기 위해 사후 분석(예: Bonferroni post-test)에 이어 양방향 ANOVA를 수행합니다.
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SWIP의 자동화된 분석
- 한 번에 단일 웜에서 자동화된 분석을 수행합니다. 추적 소프트웨어 분석을 실행하는 카메라, 웜 트래커 소프트웨어 및 스크립트를 설정하는 프로토콜은 Hardaway 등에서자세히 설명된다.
- 간단히, 1.1.2 절에 설명된 바와 같이, 속눈썹 피크를 활용한 유리 반점 판에 하나의 후반 L4 단계 헤르마프로디트를 놓는다. 당시 한 웜의 수영 비디오를 기록하고 웜 트래커 소프트웨어를 사용하여 신체 굽힘 빈도를 계산합니다.
- 추적 소프트웨어와 함께 제공된 스크립트를 따라 웜 스래싱 주파수를 얻고 웜 스래싱 데이터에서 열 맵을 생성합니다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Amphetamine | Sigma | 51-63-8 | |
| Depression glass spot plate | Corning | Corning, Inc. 722085 | |
| Eye lash | |||
| Graphing and statistical software | Prism | Graphpad 5 | |
| Osmometer | Advanced Instruments, Inc | Model 3320 | |
| Spreadsheet | MS office | Microsoft Excel | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Model tlb3. 1 stemi2000 | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | RB=S5016 | |
| Superglue | Loctite | 1647358 .14 oz. | |
| SwimR sofware | 10.18129/B9.bioc.SwimR | ||
| Tracker 2 | Worm Tracker 2.0 | www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/ | |
| Video recording software | Virtualdub | http://www.virtualdub.org/ |
