Overview
果蝇 幼虫有专门的感官神经元——新感官——其对潜在有害热刺激的反应会触发动物的逆向行为——或所谓的"无菌"行为。此视频描述了一种通过记录幼虫行为来评估热新感的方法，以响应当地在基质层上应用热探针。因此，这种方法称为局部热探头检测。
Protocol
该协议是查托帕迪亚伊等人的摘录，本地和全球方法评估热新奇在德罗索菲拉拉瓦，J.维斯Exp.(2012).
1. 局部热探针分析
我们使用 Pro-Dev 工程公司制造的定制热探针（参见材料表）为单个幼虫体段提供有毒的热刺激。虽然此探头具有最佳设计功能（小金属尖端约 0.07 mm2 区域，并且能够精确地将设定点温度从 23 °C 到 65 °C）保持在 23 °C 至 65 °C 之间，但任何具有小尖端可加热到固定温度长达 20 秒的工具都应足够。探针尖端用于刺激早期3星 幼虫精确在腹部段A4的后部中线（见 图1）。为了应对这种热刺激，幼虫通常会表现出横向滚动360度或以上的逆向退出行为。这种行为不同于它们对非有毒室温金属探头的轻触反应，后者通常涉及其体质活动的短暂暂停。
热探头测定协议：
- 将热探头的预设定温度设置为所需的设定点。
- 使用画笔或钳子将单个幼虫轻轻地转移到平面平台上（我们通常使用从活页夹中切出的一小块乙烯基），随后将刺激幼虫。在与热探针接触之前，幼虫应被薄薄的水膜覆盖。覆盖幼虫的水膜应尽可能少，并完全覆盖幼虫，同时确保幼虫在接触乙烯基时不会干燥。
- 轻轻按压探针尖对幼虫在A4段应用光压与尖端在探针和幼虫表面之间的约45°角（见 图1）。压力应导致幼虫表面轻微凹痕，通常足以防止运动。如果幼虫继续移动，施加稍大的压力，它通常会停止。不要记录来自幼虫的数据，这些数据会超出视界范围，或在响应或 20 年代截止之前无法实现持续探针接触的数据。
- 继续刺激幼虫，直到表现出戒断反应，或直到达到20秒的截止，以先发生者为准。响应幼虫通常首先表现出抬起头部和尾部的初步行为。这通常伴随着滚动至少360度的退出行为。只有360度的整卷得分为无节制行为（初步头部或尾部提升不是）。
- 启动退出行为后，与探头进行释放接触，并记录延迟或退出时间。如果在 20 秒内未观察到任何戒断行为，则幼虫为非响应者。响应者可进一步分为两类。如果在 5 秒内显示退出行为，则幼虫是快速响应者。如果在 5-20 秒之间显示退出行为，则幼虫是反应迟缓的（见巴布科克等人的图 1，Curr）。 比奥(2009)).
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Representative Results
图1：为局部热探头检测设置的实验。 热探针由热控制装置控制，用于设置和维持探头的温度。探针垂直于前柱轴，用于以45°到水平的角度刺激幼虫。如图所示，探针接触是专门在腹部段 A4 进行。用户必须保持这种接触与温和的压力，直到20秒的截止或直到滚动行为开始。如果温度被视为有毒，幼虫将表现出以至少一个360°滚动为特征的逆向戒断行为。卷的数量可以是单个或多个（参见 图 2B）。 请单击此处查看此图的更大版本。
图2：使用热探头检测对行为反应进行量化。 （A） 将属于每个类别（快速、慢速和非响应者）的响应者百分比与温度进行绘图。（B） 在四种不同的有害性测试温度（42 °C、44 °C、46 °C、48 °C、50°C 和 52 °C）中显示的叶片数量与每种幼虫的卷数的绘图。 请单击此处查看此图的更大版本。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermal Probe | Pro-Dev Engineering | Custom-built on demand | Contact information can be provided on request |
| Leica DFC290 12v/400mA Color camera | Leica Microsystems | 12730080 | Any equivalent camera will do. |
| Leica MZ6 microscope | Leica Microsystems | Part number for MZ6 zoom body (optics carrier) is 10445614 | |
| Schott Ace Modulamp Unit | Schott AG | A20500 | |
| Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light Guide | Schott AG | Schott A08575 | |
| Thermal Control Unit | TSCI corp. | Custom Built | Details can be provided on request |
| Zeiss Stemi 2000 microscope | Carl Zeiss, Inc. | NT55-605 | Any equivalent microscope will do. |
| Forceps | Fine Science Tools | FS-1670 | |
| Paintbrush | Blick Art Materials | 06762-1002 | |
| 35 X 10 mm Polystyrene Petri Dish | Falcon BD | 351008 | We have not tested alternative dishes. |
| Piece of vinyl | Office Depot | 480009 |
