Ensaio de Habituação ao Toque: Um Método para Estudar a Aprendizagem Não Associativa em C. elegans

Abstract

Fonte: Mersha, M. D., et al. Consequências comportamentais e reprodutivas de longo prazo da exposição embrionária a tóxicos de baixa dose. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo apresenta o ensaio de habituação ao toque, um método comportamental de C. elegans para avaliar a mecanosensação e quantificar o tempo de habituação.

Protocol

O protocolo a seguir é um trecho de Mersha et al. Consequências comportamentais e reprodutivas de longo prazo da exposição embrionária a tóxicos de baixa dose, J. Vis. Exp. (2018)

1. Ensaio de habituação de toque anterior
   1. Transfira aproximadamente 10 vermes adultos jovens sincronizados para novas placas NGM não semeadas usando um palito de fio de platina de 30 G esterilizado por fogo. Deixe os vermes intactos por 5 minutos para permitir que eles se aclimatem à nova placa.
   2. Para a resposta de habituação, use um cabelo de sobrancelha preso à ponta de um espeto de madeira ou palito de dente e esterilize mergulhando em etanol a 70%. Limpe com um lenço de papel limpo e sem fiapos e aguarde 1 minuto para que o etanol evapore. Toque suavemente o verme na cabeça (anterior do bulbo faríngeo) usando os pelos da sobrancelha. Repita os toques, permitindo 10 s entre os toques para permitir que o verme se recupere.
   3. Continue a tocar (permitindo intervalos entre estímulos de 10 s) até que o verme não se mova mais para trás. Neste ponto, o verme se habituou ao estímulo. Registre o número + ber de toques necessários para o verme se habituar.
   4. Analise a diferença entre as taxas médias de habituação dos controles tratados e não tratados usando ANOVA de uma via seguida pelo teste post hoc de Tukey.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (C. elegans do tipo selvagem) vermes	CGC		Repositório na Universidade de Minnesota
Palheta de fio de platina	Genesee Científico	59-AWP
placas de Petri	pescador	07-202-011
Microscópio de dissecção	AmScope	SM-2TYY