Ensaio de habitação de toque: um método para estudar aprendizagem não associativa em C. elegans

Overview

Este vídeo introduz o ensaio de habitação de toque, um método comportamental C. elegans de avaliar a mecanosensação e quantificar o tempo de habitação.

Protocol

O protocolo a seguir é um trecho de Mersha et al. Consequências comportamentais e reprodutivas de longo prazo da exposição embrionária a toxicantes de baixa dose, J. Vis. Exp. (2018)

1. Ensaio de habitação de toque anterior
   1. Transfira aproximadamente 10 vermes adultos jovens sincronizados para novas placas de NGM não semeadas usando uma picareta de fio de platina de 30 G esterilizada pelo fogo. Deixe os vermes imperturbáveis por 5 minutos para lhes dar tempo de aclimatar à nova placa.
   2. Para a resposta de habitação, use um pelos de sobrancelha preso à extremidade de um espeto de madeira ou palito de dente, e esterilize mergulhando em 70% de etanol. Limpe com um tecido limpo sem fiapos e espere 1 min para o etanol evaporar. Toque suavemente o verme na cabeça (anterior da lâmpada faringeal) usando o cabelo da sobrancelha. Repita os toques, permitindo que 10 s entre toques para permitir que o verme se recupere.
   3. Continue tocando (permitindo intervalos interestimulosos de 10 s) até que o verme não se mova mais para trás. Neste ponto, o verme habitou-se ao estímulo. Registo o número+ber de toques necessários para que o verme se habite.
   4. Analise a diferença entre as taxas médias de habitação dos controles tratados e não tratados usando ANOVA unidirecional seguido do teste pós-hoc de Tukey.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EtOH	Sigma-Aldrich	64-17-5
N2 (Wild-type C. elegans) worms	CGC		Repository at U of Minnesota
Platinum wire pick	Genesee Scientific	59-AWP
Petri plates	Fisher	07-202-011
Dissection Microscope	AmScope	SM-2TYY