المقايسة استجابة Photomotor: طريقة لقياس الاستجابة السلوكية من حمار وحشي اليرقات إلى تغيير مفاجئ في حالة الإضاءة

Overview

يصف هذا الفيديو المقايسة الاستجابة الحركية ليرقات حمار وحشي ويرقات مينو ذات الرأس السمين باستخدام برنامج تتبع آلي. يقيس البروتوكول الاستجابة السلوكية لأسماك اليرقات بعد تغيير مفاجئ في حالة الإضاءة.

Protocol

1. معايرة معلمات تتبع الفيديو

1. قبل التدابير السلوكية، قم بتعيين معلمات المراقبة والمعايرة في برنامج مسار الفيديو (انظر جدول المواد).
   1. ضع لوحة بئر في غرفة التسجيل مع سمكة يرقات واحدة على الأقل في بئر فردي. استخدم اللوحة والأسماك المرتبطة بها كتمثيلات لتعيين معلمات المعايرة.
   2. في برنامج مسار الفيديو، انقر فوق "ملف | إنشاء بروتوكول" ، الذي سيتم فتح مربع حوار "معالج إنشاء بروتوكول". في حقل "عدد المواقع"، أدخل عدد الآبار الفردية للوحة البئر ثم انقر فوق "موافق".
   3. في أعلى الشاشة، انقر على "عرض | ملء الشاشة" ، والتي سوف تدفع النظام لعرض عرض الكاميرا العلوية من لوحة البئر.
   4. انقر فوق رمز "رسم المناطق" الذي يظهر كثلاثة أشكال متعددة الألوان. إلى يمين منطقة عرض لوحة البئر، حدد رمز الدائرة في الحقل المسمى "المناطق".
   5. استخدم المؤشر لتحديد منطقة تتبع الفيديو الدائرية في الجزء العلوي الأيسر من لوحة البئر. حدد "علامة أعلى اليمين" ثم حدد منطقة العرض في الجزء العلوي الأيمن جيدا. ثم حدد "علامة القاع" لتحديد أسفل اليمين جيدا.
      ملاحظة:بعد رسم المخطط الدائري، من المحتمل أن يحتاج موضعه إلى تعديل.  لضبط موضع المخطط التفصيلي، انقر فوق "تحديد" ثم استخدم المؤشر لتحريك المنطقة الموضحة. أيضا، يمكن نسخ المخططات التفصيلية بالنقر فوق"نسخ"ثم "لصق".
   6. بعد تحديد مناطق تتبع البئر العلوية اليسرى وأعلى اليمين وأسفل اليمين، انقر فوق "إنشاء" لحث البرنامج على تحديد مناطق المشاهدة لل آبار المتبقية تلقائيا.
   7. في المنطقة المسماة "المعايرة"، انقر على "رسم المقياس". استخدم المؤشر لرسم خط أفقي عبر اللوحة. بمجرد رسم الخط، سيظهر مربع حوار يسمى "قياس المعايرة". أدخل طول لوحة جيدا وانقر فوق "موافق".
   8. قم بإنهاء مدير الرسم بالنقر فوق رمز "رسم المناطق".
   9. انقر على أيقونة "البلاط".  باستخدام المؤشر، قم بتمييز كافة المربعات التي تظهر على شاشة العرض بحيث يكون كل مربع أخضر.
      ملاحظة: يظهر رمز المربعات كمجموعة من ستة مربعات صغيرة فردية
   10. "انقر فوق عرض| ملء الشاشة".  إلى يمين منطقة عرض اللوحة، انقر فوق "Bkg" في المربع المسمى "عتبة الكشف". استخدم شريط ضبط العتبة لتعيين عتبة الكشف عن البكسل. مرة واحدة، يتم تحديد عتبة الكشف عن بكسل المناسبة، انقر فوق "تطبيق على المجموعة".
       ملاحظة:يحدد هذا البروتوكول عتبة الكشف عند 13 في الوضع الأسود لملاحظات سمك الحمار الوحشي وفي 110 في وضع شفاف لملاحظات مينو fathead.
   11. في المربع المسمى "عتبة الحركة"، أدخل معلمات تتبع سرعة الحركة المطلوبة. بمجرد تعيين معلمات السرعة، انقر فوق "تطبيق على المجموعة".
       ملاحظة:يحدد هذا البروتوكول حركات صغيرة/كبيرة بمعدل 20 مم/ثانية وحركات غير نشطة/صغيرة بمعدل 5 مم/ث. هذه التحديدات برمجة البرنامج لتتبع حركة الأسماك اليرقات في ثلاثة مستويات سرعة مختلفة: غير نشط (تجميد) = < 5 مم / ثانية، صغيرة (المبحرة) = 5-20 ملم / ثانية، وكبيرة (انفجار) = > 20 ملم / ثانية.
   12. انقر فوق "معلمات | معلمات البروتوكول" من القائمة المنسدلة. في مربع الحوار، حدد علامة التبويب "الوقت". أدخل وقت الملاحظة ووقت التكامل. بعد إدخال المعلمات انقر فوق "موافق".
   13. لتعيين ضوء / الظلام أوقات ضوئية وشدة الضوء لكل photoperiod فتح مربع الحوار إعدادات برنامج التشغيل الخفيفة عن طريق تحديد "القيادة الخفيفة" من القائمة المنسدلة "المعلمات".
       ملاحظة:راجع فيديو البروتوكول لإعداد عدة مصابيح ضوئية داكنة.
   14. بعد تعيين معلمات تعقب الفيديو، احفظ بروتوكول المراقبة.
       ملاحظة:يلاحظ هذا البروتوكول سلوك الأسماك على مدى فترة 50 دقيقة تتضمن مرحلة تأقلم مدتها 10 دقائق تليها 4 مراحل متغيرة للضوء / الظلام تتكون من فترتين ضوئيتين مدة كل منهما 10 دقائق وفترات غامقتين مدة كل منهما 10 دقائق. يتم تعيين وقت التكامل لقياس السلوك لكل دقيقة من التجربة السلوكية 50 دقيقة.

2. مراقبة سلوك اليرقات الأسماك الحركية وفوتوموتور

1. ضع لوحة البئر التي تحتوي على أسماك تجريبية في غرفة التسجيل السلوكي.
2. في برنامج تتبع الفيديو، افتح بروتوكول التتبع الذي تم تطويره في الخطوة التالية.
3. في عارض تتبع الفيديو ، تحقق للتأكد من أن جميع اليرقات مرئية على شاشة الكمبيوتر ، وأن يرقة فردية واحدة فقط موجودة في كل بئر ، وأن الآبار الفردية يتم محاذاتها داخل مناطق المراقبة التي تم تحديدها في الخطوتين 1.1.5 و 1.1.6.
4. انقر على "تجربة | تنفيذ".
   ملاحظة:سيقوم النظام بمطالبة المستخدم بتوفير اسم وموقع لحفظ بيانات المراقبة.
5. بمجرد تحديد اسم بيانات المراقبة وحفظها، انقر على أيقونة "عدة صور حية" لتسليط الضوء على جميع مناطق المشاهدة المحددة مسبقا
   ملاحظة: يقع هذا الرمز في أعلى شاشة الكمبيوتر ويظهر كمربع مقسمة إلى أربعة مربعات أصغر. سيؤدي النقر على هذا الرمز إلى تسليط الضوء على جميع مناطق المشاهدة المحددة مسبقا.
6. أغلق لوحة غرفة التسجيل وانقر على "الخلفية | ابدأ" على شاشة الكمبيوتر.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well plates	Fisher Scientific	08-772-52	Larval zebrafish behavioral recording chambers
24-well plates	VWR	10062-896	Larval fathead minnow behavioral recording chambers