Overview
Denne video beskriver in vivo elektroporation, som er en teknik til DNA-levering i ependymogliale celler hos voksne zebrafisk.
Protocol
1. Elektroporation
- Fjern fisken fra injektionsopsætningen, mens du stadig holder den i svampen.
- Fordyb indersiden af spidsen af elektroderne i ultralydsgelen.
- Dæk fisken telencephalon med en lille mængde ultralyd gel.
- Placer fiskehovedet mellem elektroderne, og placer den positive elektrode på den ventrale side af fiskens hoved og den negative elektrode på dorsalsiden (Figur 1C), mens fiskens krop stadig er i svampen. Dette indstiller retningen af strømmen af den strøm, der er nødvendig for at elektroporate ependymoglia placeret i subventricular zone.
- Tryk elektroderne forsigtigt og præcist mod telencephalon (Figur 1 C). Administrere strømmen med fodpedalen. Hold elektroderne på plads, indtil alle fem impulser er færdige.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1: Skematisk repræsentation af koronade del af den everted zebrafisk telencephalon. (A) Ordning med en koronarsektion af zebrafisktelncephalon, der fremhæver placeringen af ependymogliale celler, som er forende ventrikulær overflade og opbygning af ventral ventrikelvæggen. Dorsal ependymal lag bygger bro mellem de to halvkugler og dækker hjertekammer (V), der ligger i mellem to cellelag: ependymoglial og ependymal. (B) Til venstre et fotografi af zebrafiskhovedet taget ovenfra, der fremhæver telencephalonens position med en hvid stiplet linje. En glas kapillær er afbildet i rødt, sammen med målet site for kapillær indsættelse. Afbilledet til højre er en skematisk af zebrafisk hjerne viser placeringen af plasmid injektion i rødt. Det skal bemærkes, at glaskapillæren ikke rører telencephalonen, og at plasmidet injiceres lige over telencephalonen i ventrikel. T = telencephalon, OT = optisk tectum. (C) Afbildet til venstre er et fotografi af zebrafisk hovedet (sidevisning), og til højre er en skildring af hovedet (sidevisning), der viser placeringen af elektroder med henblik på at målrette telencephalon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
