À Vivo Électroporation : une méthode spécifique au site pour transfecter le poisson zèbre

Overview

Cette vidéo décrit l’électroporation in vivo, qui est une technique pour la livraison d’ADN dans les cellules épendymoglial chez le poisson zèbre adulte.

Protocol

1. Électroporation

1. Retirer le poisson de l’injection tout en le tenant dans l’éponge.
2. Plonger le côté intérieur de la pointe des électrodes dans le gel à ultrasons.
3. Couvrir le télencéphale de poisson avec une petite quantité de gel à ultrasons.
4. Placez la tête de poisson entre les électrodes, en plaçant l’électrode positive sur le côté ventral de la tête du poisson et l’électrode négative sur le côté dorsal (figure 1C), tout en tenant le corps du poisson dans l’éponge. Cela définit la direction du flux du courant nécessaire à l’électroporate ependymoglia positionné à la zone subventriculaire.
5. Appuyez sur les électrodes doucement et précisément contre le télencéphale (Figure 1 C). Administrer le courant avec la pédale. Maintenez les électrodes en place jusqu’à ce que les cinq impulsions soient terminées.

Representative Results

Figure 1 : Représentation schématique de la section coronale du télencéphale everted zebrafish. ( A )Schémad’une section coronale de télencéphale de poisson zèbre, mettant en évidence la position des cellules ependymoglial, qui tapissent la surface ventriculaire et construisent la paroi ventriculaire ventrale. La couche épendymale dorsale fait le pont entre les deux hémisphères et recouvre le ventricule (V), situé entre deux couches cellulaires : ependymoglial et épendymal. (B) Sur la gauche, une photographie de la tête de poisson zèbre prise d’en haut, mettant en évidence la position du télencéphale avec une ligne blanche pointillée. Un capillaire en verre est représenté en rouge, ainsi que le site cible pour l’insertion capillaire. Sur la photo de droite est un schéma du cerveau de poisson zèbre montrant la position de l’injection de plasmides en rouge. Il convient de noter que le capillaire en verre ne touche pas le télencéphale et que le plasmide est injecté juste au-dessus du télencéphale dans le ventricule. T = telencéphalon, OT = tectum optique. (C) Représenté sur la gauche est une photographie de la tête de poisson zèbre (vue latérale), et sur la droite est une représentation de la tête (vue latérale) montrant la position des électrodes afin de cibler le télencéphale.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662