Overview
וידאו זה מתאר electroporation vivo, שהיא טכניקה להעברת DNA לתוך תאים ependymoglial ב זברה למבוגרים.
Protocol
1. אלקטרופולציה
- מוציאים את הדגים ממסדר ההזרקה ועדיין מחזיקים אותו בספוג.
- לטבול את הצד הפנימי של קצה האלקטרודות בג'ל אולטרסאונד.
- מכסים את טלנצפלון דגים עם כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד.
- מקמו את ראש הדג בין האלקטרודות, והניחו את האלקטרודה החיובית בצד הגחוני של ראש הדג ואת האלקטרודה השלילית בצד הגבי (איור 1C),תוך החזקת גוף הדג בספוג. זה קובע את כיוון הזרימה של הזרם הדרוש כדי electroporate ependymoglia ממוקם באזור subventricular.
- לחצו בעדינות ובדיוק על הטלאנצפלון(איור 1 C). לנהל את הזרם עם דוושת הרגל. החזק את האלקטרודות במקום עד שכל חמשת הפולסים יסתיימו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 1: ייצוג סכמטי של קטע קורנל של טלנצפלון זברה-פיש הנצחי. (A)תוכנית של קטע קורנל של טלנצפלון זברה, המדגיש את המיקום של תאים ependymoglial, אשר בטנה משטח החדר ובניית הקיר החדרי הגחוני. שכבת הפנדימלית הגבית מגשרת בין שתי ההמיספרות ומכסה את החדר (V), הממוקם בין שתי שכבות תאים: אפנדימוגליאלי ו אפנדימאלי. (B) משמאל, תצלום של ראש הזברה שנלקח מלמעלה, המדגיש את המיקום של טלנצפלון עם קו מקווקו לבן. נימי זכוכית מתואר באדום, יחד עם אתר היעד להחדרה נימי. בתמונה בצד ימין הוא סכמטי של המוח זברה מראה את המיקום של הזרקת פלסמיד באדום. יש לציין כי נימי הזכוכית אינם נוגעים בטלנצפלון וכי הפלסמיד מוזרק ממש מעל הטלנצפלון לחדר. T = טלנצפלון, OT = טקטום אופטי. (C) המתואר משמאל הוא תצלום של ראש זברה דג (מבט צדדי), ומימין הוא תיאור של הראש (נוף צדדי) המציג את המיקום של אלקטרודות על מנת למקד את telencephalon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
