インビボエレクトロポレーション:ゼブラフィッシュをトランスフェクションするための部位特異的な方法

In This Article

Abstract

出典:Durovic, T., et al.成体ゼブラフィッシュ末脳におけるプラスミドDNAのin vivo送達のためのエレクトロポレーション法。J. Vis. Exp. (2019).

このビデオでは、成魚のゼブラフィッシュの上衣細胞にDNAを送達する技術であるin vivoエレクトロポレーションについて説明しています。

Protocol

1. エレクトロポレーション

魚をスポンジに保持したまま、注入セットアップから魚を取り出します。
電極の先端の内側を超音波ゲルに浸します。
魚の終脳を少量の超音波ジェルで覆います。
魚の頭を電極の間に置き、正極を魚の頭の腹側に、負極を背側に配置します(図1C)が、魚の体をスポンジに保持したままにします。これにより、脳室内領域に位置する上衣溝をエレクトロポレーションするために必要な電流の流れの方向が設定されます。
電極を終脳に優しく正確に押し付けます(図1C)。フットペダルで電流を流します。5つのパルスがすべて終了するまで、電極を所定の位置に保持します。

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Results

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図1:エバーテッドゼブラフィッシュの終脳の冠状切片の概略図(A)ゼブラフィッシュの終脳の冠状切片のスキームで、心室表面を覆い、腹側心室壁を構築している上衣膠細胞の位置を強調しています。背側上衣層は、2つの半球を橋渡しし、上衣と上衣の2つの細胞層の間に位置する心室(V)を覆っています。(B)左は、上から撮影したゼブラフィッシュの頭部の写真で、終脳の位置を白い破線で強調しています。ガラス製のキャピラリーは、キャピラリー挿入のターゲット部位とともに赤で描かれています。右の写真はゼブラフィッシュの脳の模式図で、プラスミド注入の位置を赤で示しています。ガラス毛細管は終脳に接触せず、プラスミドは終脳のすぐ上の心室に注入されることに注意する必要があります。T = 終脳、OT = 視蓋。(C)左がゼブラフィッシュの頭部の写真(側面図)、右が末脳を狙うた...