Overview
Это видео описывает виво электропорации, которая является методом для доставки ДНК в эпендимоглиальные клетки у взрослых зебры.
Protocol
1. Электропорация
- Удалите рыбу из инъекции настройки в то же время удерживая его в губке.
- Погрузите внутреннюю сторону кончика электродов в ультразвуковой гель.
- Обложка рыбы теленцефалон с небольшим количеством ультразвукового геля.
- Располагайте головку рыбы между электродами, помещая положительный электрод на вентраловую сторону головы рыбы и отрицательный электрод наспинной стороне (рисунок 1С),сохраняя при этом тело рыбы в губке. Это определяет направление потока тока, необходимого для электропората эпендимоглии, расположенного в субвентрикулярной зоне.
- Нажмите электроды осторожно и точно против теленцефалона(рисунок 1 C). Администрирование тока с педалью ноги. Держите электроды на месте до тех пор, пока все пять импульсов не будут закончены.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Рисунок 1: Схематическое представление корональной части вечного теленцефалона зебры. (A)Схема коронального участка теленцефалона зебры, подчеркивая положение эпендимоглиальных клеток, которые выстилают желудочковой поверхности и строительство брюшной брюшной стенки. Спинной эпендимальный слой преодолевает два полушария и покрывает желудочек (V), расположенный между двумя слоями клеток: эпендимоглиальным и эпендимальным. (B)Слева, фотография головы зебры, взятая сверху, подчеркивая положение теленцефалона с белой пунктирной линией. Стеклянная капиллярная изображена красным цветом, наряду с целевой площадкой для капиллярной вставки. Справа изображена схема мозга зебры, показывающая положение плазмидной инъекции в красном цвете. Следует отметить, что стеклянная капиллярная не касается теленцефалона и что плазмида вводится чуть выше теленцефалона в желудочек. T - теленцефалон, OT - оптическая тектум. (C)Изображена слева фотография головы зебры (вид сбоку), а справа изображение головы (вид сбоку), показывающее положение электродов для того, чтобы нацелиться на теленцефалон.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
