in vivo Electroporación: un método específico para transfectar peces cebra

Abstract

Fuente: Durovic, T., et al. Método de electroporación para la entrega in vivo de ADN plasmídico en el telencéfalo adulto del pez cebra. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la electroporación in vivo, que es una técnica para la entrega de ADN en células ependimogliales en peces cebra adultos.

Protocol

1. Electroporación

1. Retire el pez de la configuración de inyección mientras aún lo sostiene en la esponja.
2. Sumerja la cara interna de la punta de los electrodos en el gel de ultrasonido.
3. Cubra el telencéfalo del pez con una pequeña cantidad de gel de ultrasonido.
4. Coloque la cabeza del pez entre los electrodos, colocando el electrodo positivo en el lado ventral de la cabeza del pez y el electrodo negativo en el lado dorsal (Figura 1C), mientras mantiene el cuerpo del pez en la esponja. Esto establece la dirección del flujo de la corriente necesaria para electroporar ependimolía posicionada en la zona subventricular.
5. Presione los electrodos suavemente y con precisión contra el telencéfalo (Figura 1 C). Administre la corriente con el pedal. Mantenga los electrodos en su lugar hasta que terminen los cinco pulsos.

Results

Figura 1: Representación esquemática de la sección coronal del telencéfalo del pez cebra evertido. (A) Esquema de una sección coronal del telencéfalo del pez cebra, destacando la posición de las células ependimmoliales, que recubren la superficie ventricular y forman la pared ventricular ventral. La capa ependimaria dorsal une los dos hemisferios y cubre el ventrículo (V), ubicado entre dos capas celular...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gel de ultrasonido	SignaGel, Laboratorios Parker INC	De 15 a 60	Gel de electrodos
Electrodos BTX Tpinezertrodes	Pinza de platino, aparato BTX Harvard	45-0486	1mm de diámetro
Dispositivo de electroporación	Sistema de electroporación de onda cuadrada BTX ECM830, aparato BTX Harvard	45-0662

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