In vivo (İn canlı) Elektroporasyon: Zebra Balığını Nakletmek İçin Bölgeye Özgü Bir Yöntem

In This Article

Abstract

Kaynak: Durovic, T., et al. Yetişkin Zebra Balığı Telencephalon'da Plazmid DNA'nın İn Vivo Verilmesi için Elektroporasyon Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, yetişkin zebra balıklarında ependimomglial hücrelere DNA verilmesi için bir teknik olan in vivo elektroporasyon açıklanmaktadır.

Protocol

1. Elektroporasyon

Balığı süngerin içinde tutmaya devam ederken enjeksiyon kurulumundan çıkarın.
Elektrotların ucunun iç tarafını ultrason jeline batırın.
Balık telensefalonunu az miktarda ultrason jeli ile örtün.
Balık kafasını elektrotların arasına yerleştirin, pozitif elektrodu balığın kafasının ventral tarafına ve negatif elektrodu sırt tarafına yerleştirin (Şekil 1C), balığın vücudunu süngerde tutmaya devam ederken. Bu, subventriküler bölgede konumlandırılmış ependimomglia'yı elektroporate etmek için gerekli akımın akış yönünü ayarlar.
Elektrotları telensefalona karşı nazikçe ve hassas bir şekilde bastırın (Şekil 1, C). Akımı ayak pedalı ile yönetin. Beş darbenin tümü bitene kadar elektrotları yerinde tutun.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

figure-results-1
Şekil 1: Everted zebra balığı telensefalonun koronal bölümünün şematik gösterimi. (A) Zebra balığı telensefalonun koronal bölümünün şeması, ventriküler yüzeyi kaplayan ve ventral ventriküler duvarı oluşturan ependimoglial hücrelerin konumunu vurgulamaktadır. Dorsal ependimal tabaka, iki hemisfer arasında köprü kurar ve iki hücre tabakası arasında bulunan ventrikülü (V) kaplar: ependimogliyal ve ependimal ...