Questo video dimostra metodi per indurre transurethrally infezioni del tratto urinario del mouse e quantificare l'entità delle infezioni che ne derivano.
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Articolo metodologico
Induzione transuretrale di infezioni del tratto urinario mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Uropatogeni ceppi batterici di interesse vengono coltivate su agar. In generale, uropatogeni
Protocollo
I. Preparazione dei cateteri uretrali
- Per ogni vescica del mouse e reni da campionare, posto 5-6 grani in acciaio inox (vescica, 1.6 mm o dimensione 0,9-2,0 miscela mm) o perle di ossido di zirconio (rene, 0,5 mm di diametro) in una provetta provetta Microbank ™, rispettivamente. Autoclave il tallone contenenti tubi.
- Dopo i tubi raffreddare a temperatura ambiente, aggiungere 200 microlitri di PBS sterile ad ogni acciaio inox tallone contenenti tubi e 400 microlitri di PBS sterile ad ogni ossido di zirconio contenenti perline tubo.
- Prepariamo cateteri uretrali come descritto da Hung e Hultgren 13. Autoclave una coppia pulita d....
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Discussione
Induzione di infezioni del tratto urinario del mouse tramite l'inoculazione di batteri transuretrale è una procedura ormai consolidata, ma tecnicamente impegnativo 11. Hung e Hultgren recentemente pubblicato un eccellente rassegna di tecniche transuretrale di infezione del tratto urinario del mouse 13. In questo lavoro, cerchiamo di illustrare ulteriormente i punti più fini di questo approccio sperimentale.
I novizi possono praticare la loro tecnica eseguendo una la.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Shelly Xie e Jennifer Payne per la loro assistenza tecnico esperto. Questo lavoro è stato reso possibile attraverso sovvenzioni da parte della Società di Urologia Pediatrica e lo Stanford Research Pediatric Fondo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Provette criogeniche, 2,0 ml in polipropilene (senza cappucci) | E&K Scientific | 640201 | |
| Cappucci per provette criogeniche, con anello ’O’ | E&K Scientific | 440011-N | |
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | |
| Perle di ossido di zirconio (0,5 mm) | Next Advance | ZROB05 | |
| Perle in acciaio inossidabile (1,6 mm) | Next Advance | SSB16 | |
| Miscela di perle in acciaio inossidabile (0,9-2,0 mm) | Next Advance | SSB14B | |
| Topi CBA/J, femmine di 8-12 settimane | Jackson Laboratory | 000656 | |
| Soluzione salina tamponata al fosfato (NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 4,3 mM, KH2PO4 1,4 mM) | EMD Millipore | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | |
| Agar LB | |||
| Brodo LB | EMD Millipore | 1.10285.0500 | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | NDC 10019-773-60 | |
| Loop per inoculazione | Fisher Scientific | 22-363-601 | |
| Polvere di agar eosina-metilene blu (EMB) | Himedia Laboratories | MM022-500G | |
| Polvere di agar MacConkey | Difco Laboratories | 212123 | |
| Polvere di agar LB | Difco Laboratories | 244520 | |
| Tubazione in polietilene non radiopaca Intramedic, PE10 [diametro interno 0,28 mm (0,011 pollici); diametro esterno 0,61 mm (0,024 pollici)] | BD Biosciences | 427401 | |
| Aghi da 30 gauge, 1/2 pollice | BD Biosciences | 305106 | |
| Siringa tubercolina da 1 ml con attacco Slip-Tip | BD Biosciences | 309602 | |
| Siringa da 3 ml con attacco Luer-Lock | BD Biosciences | 309585 |
Riferimenti
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial C....
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Ristampe e permessi
