이 문서는 stepwise 방식으로 표현하고자하는 일반적으로 사용되는 체외에서 assays.
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이 논문에서
요약
초록
Schwann 세포는 척수 부상 다음과 복구 전략에서 일반적으로 사용되는 셀 중 하나입니다. Schwann 세포가 axonal 재생을 지원하고 secreting 성장 요인의 1,2로 돋아 및 유착 분자 3 세포외 기질 분자 4 증진 성장을 제공할 수 있습니다. 또한 그들은 부상 5 사이트에 demyelinated axons를 myelinate.
그렇지만 이식 이어 Schwann 전지 보형물 사이트에서 이주 없어하고 호스트 astrocytes 6,7로 뒤섞다 없어. Schwann 세포와 astrocytes 사이에 날카로운 경계의 형성이 결과, proximally 및 distally 호스트 조직에 그래프트 다시를 종료하려고 성장 axons에 대한 장애물을 만드는. Schwann 세포와 접촉 Astrocytes도 비대를 받아야하고 억제 분자 8-13을 - 규제.
시험 관내 assays에서 모델 Schwann 세포 astrocyte 상호 작용하는 데 사용되었습니다과 세포 동작을 기본 메커니즘을 이해하는 것이 중요했습니다.
시험 관내 assays에서 이들은 공동 문화 두 가지 세포를 분리 전선에만 작은 격차로 다른 지역을 점유 각 세포 유형으로 두 개의 다른 세포를 사용하여 만든 경계 분석을 포함합니다. 세포 분열 및 마이 그 레이션으로 두 세포 면에서 서로 가까이 그리고 마지막으로 충돌하십시오. 이것은 경계에서 분석하는 두 세포 인구의 동작을 수 있습니다. 같은 기술의 또 다른 변화는 문화의 두 세포 인구를 섞어하고 시간이 지남에 따라 두 세포 유형은 Schwann 세포와 분리 함께 여러 Schwann - astrocyte 경계를 만드는 astrocytes 사이에 섬이 함께 clumped하는 것입니다.
두 세포 유형의 상호 작용을 연구에 사용되는 두 번째 분석은 세포의 움직임이 다른 세포 유형 monolayer 14,15의 표면에 추적할 수있는 마이 그 레이션 분석이다. 이 분석은 일반적으로 바뀌 coverslip 분석으로 알려져 있습니다. Schwann 세포는 작은 유리 파편에 교양하고 그들은 astrocyte monolayers의 표면에 얼굴을 거꾸로하고 마이 그 레이션이 coverslip의 가장자리에서 평가됩니다.
두 assays은 세포 배제와 경계 형성에 관련된 기본 메커니즘을 연구의 수단이되었습니다. 분자의 일부는 이러한 기술이 N - Cadherins 15, 콘드로이틴 황산염의 proteoglycans (CSPGs) 16,17, FGF / 헤파린 18 에프 / Ephrins 19 등이 사용 확인.
이 문서는 stepwise 방식으로 경계 분석 및 마이 그 레이션 분석을 설명하고 발생할 수있는 가능한 기술적인 문제를 명료하게하다 예정입니다.
프로토콜
1. 경계 분석 :
- 기본 준비 : 상공 회의소 슬라이드는 폴리 - D - 라이신 야간 및 멸균 유리 슬라이드로 코팅 아르는 실험을 시작하기 전에 준비가되어 있습니다. 매체는 Dulbecco의 수정된 이글의 10% 소태아 혈청 (FCS)와 보충 중간 (DMEM),, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 - Fungizon (PSF)를 사용하여 준비가되어 있습니다. 또한 칼슘 / 마그네슘 무료 행크스 균형 소금 용액 (HBSS)의 병이 준비됩니다.
- 플라스크에 교양 기본 쥐 Schwann 세포는 0.1 % 트립신을 사용하여 3 분 trypsinized 있습니다. 기본 쥐 astrocyte 문화는 0.1 % 트립신을 사용하여 5 분 trypsinized입니다.
트립신은 DMEM를 추가하면 10% FCS, 1 % PSF로 보충하여 inactived 있습니다. - Trypsinized Schwann 세포와 astrocytes 15 ML 팰컨 튜브를 별도로 전송하고 5 분 300G에 centrifuged 있습니다.
- Schwann 세포와 astrocytes은 (세포 밀도의 변화에 대한 대표적인 결과 섹션을 참조하십시오) 2 × 10 6 밀도에 다시 중지합니다.
- Schwann 세포 현탁액의 5....
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토론
위에서 설명한 assays은 Schwann - astrocytes 및 astrocytic 환경에서 제한된 Schwann 세포 마이 그 레이션 사이의 경계 형성에 관련된 여러 요인의 역할을 보여주는 여러 연구에 사용되었습니다.
그것이 전략의 개발 최적화하도록하고 이식 다음 Schwann 세포 이식의 통합을 강화하고 이렇게에서 허용 호스트 조직에 그래프트 뒷부분에서 재생의 axons의 출구를 촉진하는 것처럼 이러한 이벤트를 기본 메커니즘을 이해하는 것은 필수적입니다 연결의 형성 호스트 조직과 함께.
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
우리는 그녀의 친절한 도움 필립 워렌 감사하고 싶습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 41966-029 | |
| HBSS | Invitrogen | 14170-088 | |
| FCS | Invitrogen | 10091-148 | |
| PSF | Invitrogen | 15240-062 | |
| BPE | Invitrogen | 13028-014 | |
| Forskolin | Calbiochem | 344273 | |
| 커버글라스 | VWR international | 631-0149 | |
| 커버글라스(직사각형) | Menzel-Glaser | BB022050A1 | |
| 챔버 슬라이드 | Nalge Nunc international | 177380 | |
| 4 웰 플레이트, 6 웰 플레이트 | Nalge Nunc international | 4 웰 플레이트6 웰 플레이트 | |
| rat p75 항체 | EMD Millipore | MAB365 | |
| GFAP 항체 | Dako | Z0334 | |
| 2차 항체 (Alexa 접합) | Invitrogen | A-11004 A-11034 | Goat anti mouse 568Goat anti Rabbit 488 |
| 2차 비오틴화 항체 | Vector Laboratories | Goat anti mouse | |
| DAB 정제 | Sigma-Aldrich | D4418 | |
| ABC elite 키트 | Vector Laboratories | PK-6100 | |
| 정밀 핀셋 | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6168 | |
| Fluorosave | Calbiochem | 345789 |
참고문헌
- Assouline, J. G. Rat astrocytes and Schwann cells in culture synthesize nerve growth factor-like neurite-promoting factors. Brain Res. 428, 103-118 (1987).
- Taylor, J. S., Bampton, E. T. Factors secreted by Schwann cells stimul....
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