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Estudos de célula-célula e célula substrato coesão-adesão têm sido historicamente realizados em culturas de monocamada aderente sobre substratos rígidos. Células dentro de um tecido, no entanto, normalmente são encerrados dentro de uma massa de tecido de forma compacta em que as células estabelecer conexões íntimas com muitas quase-vizinhos e com componentes da matriz extracelular. Assim, o meio químico e forças físicas experimentadas por células dentro de um tecido 3D são fundamentalmente diferentes do que aqueles experimentados por células cultivadas em cultura em monocamada. Isto tem sido demonstrado que marcadamente impacto morfologia celular e sinalização. Vários métodos têm sido desenvolvidos para gerar culturas de células em 3D, incluindo encapsulamento de células em géis de colágeno ou em um biomaterial andaimes 2. Tais métodos, embora úteis, não recapitular a arquitetura de adesão íntima direto célula-célula encontrada em tecidos normais. Ao contrário, eles mais de perto os sistemas aproximados de cultura em que as células individuais são frouxamente dispersas dentro de uma malha 3D de produtos ECM. Aqui, descrevemos um método simples em que as células são colocadas em cultura pendurado queda e incubados em condições fisiológicas, até que a verdadeira forma esferóides 3D em que as células estão em contato direto uns com os outros e com componentes da matriz extracelular. O método não requer equipamento especializado e pode ser adaptado para incluir a adição de qualquer agente biológico em quantidades muito pequenas que podem ser do seu interesse na elucidação efeitos sobre célula-célula ou célula-ECM interação. O método também pode ser usado para co-cultura dois (ou mais) diferentes populações de células, de modo a elucidar o papel das interações célula-célula ou célula-ECM na especificação de relações espaciais entre as células. Célula-célula e célula coesão ECM-adesão são os pilares dos estudos de desenvolvimento embrionário interação celular, tumor de estroma na invasão maligna, cicatrização de feridas, e para aplicações de engenharia de tecidos. Este método simples irá fornecer um meio de gerar tecido celular-como agregados para a medição de propriedades biomecânicas ou para análise molecular e bioquímica em um modelo fisiologicamente relevantes.