CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

البروتوكول

1. تعد قناة ميكروفلويديك مع سطح CD4 ⁺ المضادة للbiotinlayted.
2. ضخ 10 مليلتر من الدم في العينة 5 مل / دقيقة في قناة ميكروفلويديك مع ضخ حقنة.
3. اخراج الدم في 20 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة مع برنامج تلفزيوني.
4. حقن محلول مخفف FACS lysing (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5ul/min لمدة 15 دقيقة.
5. احتضان لمدة 15 دقيقة.
6. حقن CD3 الابتدائي ⁺ الحل الأضداد (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة.
7. احتضان لمدة 2 ساعة.
8. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
9. ضخ 20 ٪ AF488 CD4 ⁺ الأضداد ، و 0.2 ٪ محلول المخزون دابي ، و 10 ٪ CD3 الثانوية في الضد ⁺ 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة في نفس الوقت.
10. احتضان لمدة 20 دقيقة.
11. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
12. عدد الخلايا تحت المجهر الفلورسنت :
    1. أبيض (بصري) -- الأسود والأبيض : خلية والغبار
    2. الأشعة فوق البنفسجية (دابي) -- أزرق : الخلية فقط
    3. الأزرق (CD4 ⁺⁾ -- الأخضر : T - اللمفاويات والوحيدات
    4. الأخضر (CD3 ⁺⁾ -- الأحمر : T - اللمفاويات فقط

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
قناة PDMS دقيقة				تم تصنيعها بواسطة قالب SU-8
دم				دم متبرع به من شخص بشري سليم. مستشفى ماس جنرال (Mass General Hospital)، 10 X كريات دم بيضاء عالية الكثافة أو مستشفى بريغهام والنساء (Brigham and Women’s Hospital).
PBS	محلول منظم	Invitrogen	14190	محلول ملحي منظم بالفوسفات من دولبيكو (Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline) بتركيز 1x.
محلول تحلل FACS		BD Biosciences	349202	مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS.
جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتين		Beckman Coulter Inc.	IM0704	تم تحضير السطح باستخدام جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتين، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS/BSA بعد الخلط مع 0.2mg من المركز و1ml من الماء منزوع الأيونات.
goat anti-hCD3delta	pAB	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-1128	مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS
rabbit anti-goat IgG PE		Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-3755	جسم مضاد ثانوي للجسم المضاد anti-CD3، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS
anti-human CD4+		BD Biosciences	557695	موسوم بـ Alexa Fluor 488، مخفف إلى 20% من المحلول المركز باستخدام PBS.
DAPI		Invitrogen	D1306	محلول 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride، مخفف إلى 0.2% من المحلول المركز باستخدام PBS.