Summary
Cet article décrit un protocole pour induire un stress psychologique chez les participants, ce qui permet aux chercheurs de mesurer psychologiques, physiologiques et neuroendocriniennes au stress au sein des participants ou entre les groupes.
Abstract
Cet article montre un protocole de stress psychologique pour une utilisation dans un environnement de laboratoire. Les protocoles qui permettent aux chercheurs d'étudier les mécanismes biologiques de la réponse au stress dans la santé et la maladie sont fondamentaux pour le progrès de la recherche dans le stress et l'anxiété. 1 Bien que de nombreux protocoles existent pour induire la réponse au stress dans le laboratoire, la négligence de nombreux de fournir un contexte naturel ou d'intégrer les aspects du stress social et psychologique. Des protocoles de stress psychologique, la méta-analyse suggère que le test de stress social Trèves (TSST) est le protocole le plus utile et approprié pour des études standardisées de réactivité hormone du stress. 2 Dans la description originale de la TSST, les chercheurs ont cherché à concevoir et évaluer une procédure capable d'induire une réponse au stress fiable dans la majorité des volontaires sains. 3 Ces chercheurs ont constaté une élévation du rythme cardiaque, pression artérielle et le stress endocrinien plusieurs markers en réponse à la TSST (un facteur de stress psychologique) par rapport à une injection de sérum physiologique (un stresseur physique). 3 Bien que la TSST a été modifié pour répondre aux besoins des divers groupes de recherche, il se compose généralement d'une période d'attente à l'arrivée, le discours d'anticipation les périodes de préparation, de la parole de performance, la performance et verbale arithmétique, suivie par une ou plusieurs périodes de récupération. La TSST exige que les participants à préparer et à livrer un discours, et verbalement répondre à un problème arithmétique difficiles dans la présence d'un public socialement évaluative. 3 Evaluation sociale et incontrôlable ont été identifiés comme des éléments clés de l'induction de stress par le TSST. 4 Lors de l'utilisation des plus d'une décennie, l'objectif de la TSST est systématiquement induire une réponse de stress, afin de mesurer les différences de réactivité, d'anxiété et d'activation de l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien (HHS) ou sympathique-surrénalien-médullaire (SAM), l'axe lors de la tâche 1. Researcsien général d'évaluer les changements dans les auto-déclarés d'anxiété, des mesures physiologiques (rythme cardiaque, par exemple), et / ou indices neuroendocrines (par exemple l'hormone de stress cortisol) en réponse à la TSST. De nombreux chercheurs ont adopté l'échantillonnage salivaires pour les marqueurs de stress comme le cortisol et l'alpha-amylase (un marqueur de l'activation du système nerveux autonome) comme une alternative au prélèvement de sang afin de réduire le stress de confusion de collecte de sang techniques. En plus des changements vécus par une personne qui remplit le TSST, les chercheurs peuvent comparer les changements entre les différents groupes de traitement (par exemple des échantillons cliniques versus contrôle en bonne santé) ou l'efficacité des interventions de réduction du stress. 1
Protocol
1. Set Up
- Toutes les recherches doivent être approuvés par l'Institutional Review Board approprié ou humaine comité d'examen des sujets avant la collecte des données.
- Idéalement, deux chambres devraient être disponibles pour effectuer les TSST. Une salle d'attente confortable devrait être disponible aux participants avant le début du TSST et pendant les périodes de récupération. Une salle d'entrevue distinct doit être utilisé lors de la préparation de discours, la performance de la parole et des portions de mathématiques de l'TSST d'introduire la nouveauté et uncontrolability.
- Disposer la salle d'entrevue afin que le participant devra faire face à des intervieweurs confédérées et vidéo de position ou de l'équipement d'enregistrement audio dans le champ visuel du participant. Sarraus devraient être disponibles pour les enquêteurs à porter pendant la TSST pour augmenter le stress durant la TSST. Demandez aux enquêteurs de maintenir un contact visuel avec les participants et s'abstenir de faire des expressions faciales émotionnelles pendant la TSST.
- Examiner attentivement èmequestion de recherche électronique (s) lors de la sélection des mesures dépendantes. Directives pour l'analyse et la publication de diverses mesures de la réponse au stress sont fournies par plusieurs sources (lignes directrices pour la publication et l'analyse des mesures psychophysiologiques sont fournis par la Société pour la recherche psychophysiologique: http://www.sprweb.org/journal/index. CFM # guidelines ). 5 Consultation de ces ressources lors de la conception d'expériences est recommandée.
- Mettre en place tous les équipements nécessaires à l'enregistrement réactions physiologiques, psychologiques ou endocriniennes de la TSST. Cet équipement peut comprendre (mais n'est pas limité à) des électrodes et équipements électroniques et / ou un logiciel pour enregistrer le rythme cardiaque, la réactivité cardiovasculaire, conductance de la peau ou la réponse, clin d'œil, la contraction musculaire / ton, le rythme respiratoire, le papier et un crayon ou des versions électroniques de instruments psychologiques tels que l'anxiété Trait d'État inventory; 6 tubes et matériaux autre collection d'échantillons d'urine, de sang ou de salive;. ou de l'équipement d'enregistrement vidéo Pour cette démonstration, nous allons utiliser trois conducteurs électrocardiogramme (ECG) électrodes pour mesurer la fréquence cardiaque pendant la TSST, et l'administration répétée de la Trait Anxiety Inventory Etat pour mesurer la réaction psychologique avant et après le stress. Nous utilisons un système d'enregistrement de base destinés à mesurer les réponses physiologiques (système BIOPAC MP36) pour enregistrer le rythme cardiaque.
- Si des échantillons de sang (plutôt que de la salive) seront collectés pendant l'expérience, les efforts pour minimiser la douleur et la détresse lors de la collecte doit être faite. Procédures de collecte de sang peut introduire d'autres stress physique ou psychologique, la réponse à la confusion TSST.
- Lorsque le participant arrive, les accueillir au sein du laboratoire. Obtenir le consentement éclairé et le siège du participant confortablement.
- Collecter des informations démographiques, les renseignements de dépistage ou additiomesures arrivée NAL qui sont requises par votre expérience. Vérifiez que le participant n'a pas consommé la nourriture ou des boissons (autres que l'eau) dans la dernière heure, si la collecte de mesures de cortisol. Une courte période de jeûne est recommandée si vous serez la collecte d'échantillons de salive pour analyse. Les changements de pH associées à des aliments acides ou de boire ou de la contamination visible peuvent interférer avec la mesure précise de marqueurs salivaires. Le dépistage toxicologique de l'urine peut être nécessaire si des mesures d'intérêt peuvent être contaminés par des médicaments ou d'autres métabolites. Informations sur les facteurs qui peuvent affecter la réponse au stress (médicaments par exemple, la maladie, le sommeil, les récents événements stressants, la phobie sociale) devrait également être envisagée lorsque les participants de dépistage.
2. Pré-stress Mesures
- Demandez au participant d'attendre confortablement pendant 45 minutes dans la salle d'attente. Vous pouvez choisir de fournir aux participants des documents à lire, comme les magazines contenant emonellement neutre contenu, ou une autre activité émotionnellement neutre pendant cette période.
- Après la période de 45 minutes d'attente, d'administrer l'inventaire d'anxiété Trait d'État pour évaluer l'anxiété pré-contrainte. 6 Alternativement, d'autres instruments qui sont conçus pour évaluer les changements d'état de stress, d'anxiété ou de relaxation peut être administré (par exemple une échelle visuelle analogique).
- Recueillir un «pré-stress" échantillon de salive. Demandez aux participants de se rincer la bouche avec de l'eau. Donnez au participant une section 5-10 cm de paille et d'un nettoyage, un flacon jetable en polypropylène 2,0 ml. Demandez aux participants de pencher la tête vers l'avant pour permettre à la salive à la piscine sur le plancher de la bouche puis passer la salive dans la paille dans le flacon. Prélever environ de 1,5 à 2,0 ml de salive par le participant. Alternativement, la salive peuvent être recueillies en utilisant la mèche absorbante dentaire (ou matériau similaire) et d'instruire les participants à mâcher ou de saturer le matériau avec de la salive. Si possible, quitter la salle pour fournir aux participants des renseignements personnels. Étiquette et de stocker tous les échantillons de salive à -20 ° C dès que possible.
- Record 5 minutes de pré-contrainte des mesures physiologiques.
3. La TSST
- Si vous comptez utiliser une salle d'entrevue séparées (pour augmenter les effets du stress de la TSST), amener le participant de la salle d'attente dans la salle d'entrevue.
- Pour commencer la période de préparation de TSST discours, lu le script suivant pour le participant: «C'est la partie préparation de discours de la tâche, vous êtes mentalement préparer un discours de cinq minutes décrivant pourquoi vous seriez un bon candidat pour votre emploi idéal. Votre discours sera filmé et examinées par un panel de juges formés à parler en public. Vous avez dix minutes pour préparer et votre temps commence maintenant. "
- Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de 10 minutes le discours de préparation. Réglez une minuterie numérique de 10 minutes et quitter la pièce. Après 10 minutes, retourner à la salle vêtu d'un sarrau de laboratoire. Lire le script suivant pour le participant: «C'est la partie discours de la tâche que vous pour prononcer un discours décrivant pourquoi vous seriez un bon candidat pour votre emploi idéal Vous devriez en parler pour l'ensemble de la période de cinq minutes... Votre temps commence maintenant. " La caméra vidéo prop doit être activé présent, pour augmenter évaluative / performances du stress.
- Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de cinq minutes le discours de performance. Si le participant cesse de parler pendant le discours, lui permettre de rester silencieux pendant 20 secondes. Si il ou elle ne reprend pas parler, prompte au participant de continuer à parler en leur ordonnant: «Vous avez encore le temps restant."
- A la fin de la période de cinq minutes le discours des performances, de lire le script suivant pour le participant: «Pendant la partie des mathématiques de cinq minutes finales de cette tâche vous sera demandé de manière séquentielle soustraire le nombre 13 de 1022 Vous verbale.Ly rapport de vos réponses à haute voix, et être invité à recommencer à partir de 1022, si une erreur est faite. . Votre temps commence maintenant "Si le participant fait une erreur, posez-leur avec:" Ce n'est pas correct, s'il vous plaît recommencer à partir de 1022 «Définir une minuterie numérique pendant 5 minutes..
- Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de 5 minutes maths performances.
- A la fin de la période de rendement en mathématiques de l'TSST, de recueillir un «post-stress" échantillon de salive.
- Administrer de stress post-Trait Anxiety Inventory Etat.
4. Mesures de réveil post-stress
- Retour aux participants de la salle d'attente d'origine. Pendant la période de récupération d'abord, demander au participant d'attendre confortablement pendant 20 minutes. Réglez une minuterie numérique de 20 minutes et quitter la salle.
- Retourner à la salle d'attente après 20 minutes et recueillir une «reprise 1" échantillon de salive.
- Durant la seconde période de récupération, d'instruire le participant à nouveau attendre confortablement pour 20 minutes. Réglez une minuterie numérique de 20 minutes et quitter la salle.
- Retourner à la salle d'attente après 20 minutes et recueillir une «reprise 2" échantillon de salive.
- Demandez au participant de remplir le «rétablissement» Trait Anxiety Inventory Etat.
- Compte rendu du participant quant à la vraie nature de l'expérience. Informer le participant que leur performance n'a pas été enregistré et qu'aucune analyse de leurs discours ou les performances en mathématiques seront menées. Expliquez aux participants que les tâches qui leur ont été présentés étaient excessivement difficiles et ne pas réfléchir à l'aptitude du participant ou de la capacité.
5. Analyse des données
- Pour analyser les mesures psychologiques, le score de chaque Etat Trait Anxiety Inventory de la pré-contrainte, de post-stress et le temps de récupération des points 6.
- Pour analyser les mesures physiologiques, calculer un score cardiaque moyenne de taux pour chacune des cinq minutes "stress pré», «préparation de discours», «la performance la parole" et "mATH "périodes de l'TSST. Alternativement, calculer des scores moyens pour chaque minute de la fréquence cardiaque ou de TSST mesure en temps discret des points lors de la TSST.
- Pour analyser les mesures neuroendocrines, des échantillons d'essai pour la concentration d'hormones salivaires utilisant des kits EIA disponibles commercialement.
6. Facultatif: Renseignements supplémentaires salivaires de cortisol protocole d'essai (reproduit à partir de Salimetrics cortisol salivaire insérez kit de dosage)
- Amener tous les réactifs salivaires kit de dosage de la température ambiante.
- Préparer le tampon de lavage selon les instructions du kit.
- Déterminer disposition de la plaque et la pipette de 25 uL de normes et de contrôles dans les puits appropriés, en double exemplaire.
- Dégel des échantillons de salive, vortex et centrifuger à 1500 XG (@ 3000 RPM) pendant 15 minutes.
- Pipeter 25 uL de liquide clair à partir d'échantillons centrifugés dans les puits appropriés de la plaque (en double).
- Préparer conjugué enzyme et la pipette 200 ul dans tous les puits. Mélanger la plaque pendant 5 minutes à 500 rpm et incuber pendant une 55 minutes supplémentaires.
- Lavez et épongez la plaque 4 fois avec un tampon de lavage.
- Ajouter 200 uL tétraméthylbenzidine (TMB) à chaque puits en utilisant une pipette multicanaux.
- Mélanger la plaque pendant 5 minutes à 500 rpm et incuber dans l'obscurité pendant 25 minutes supplémentaires.
- Ajouter 50 uL de solution d'arrêt dans chaque puits et mélanger pendant 3 minutes à 500 rpm pour arrêter les réactions.
- Essuyez la plaque de fond propre et lire la plaque dans un lecteur de plaque à 450 nm dans les 10 minutes de l'ajout de solution d'arrêt.
- Pour calculer la concentration de cortisol, de calculer la densité optique moyenne pour tous les puits en double. Soustraire la densité optique moyenne des puits de fixation non spécifique de la densité optique moyenne du zéro, standard, de contrôle et des puits d'échantillon.
- Calculer le pour cent liée (B / Bo) pour chaque norme, le contrôle et l'échantillon en divisant la densité optique moyenne de ces puits (B) par la moyennela densité optique de l'âge de puits zéro (Bo). Déterminer la concentration des contrôles et des échantillons par interpolation en utilisant un logiciel capable de logistique.
7. Les résultats représentatifs:
Les données présentées ici représentatives est compilé à partir d'un examen de la littérature et de deux études qui ont été menées dans notre laboratoire de l'après-midi avec des participants adultes sains de sexe masculin. Ces données sont destinées à environ représentent les résultats qui pourraient être trouvés en utilisant le protocole présenté dans cet article.
Ce protocole TSST (figure 1) induit une augmentation de l'anxiété auto-déclaré (tel que mesuré par l'inventaire d'anxiété Trait d'État; figure 2), la fréquence cardiaque (figure 3), et les concentrations de cortisol salivaire (figure 4). Le protocole expérimental illustre la figure 1 est destiné à fournir un exemple de comment les différentes mesures pourraient être faites lors d'une session de collecte de données avec la TSST. Le calendrier des MESURESts et l'inclusion des différentes mesures sera dicté par la question de recherche spécifique. Si vous utilisez une intervention qui vise à réduire l'anxiété et / ou la réponse au stress, augmente émoussé ou atténué dans ces mesures sont prévues.
Figure 1. Protocole expérimental Remarque: Test de stress social Trèves (TSST); Trait Anxiety Inventory Etat (STAI); période de 5 minutes de stress pré (PS); période de 10 minutes de stress anticipatoire (préparation de la parole) (AS); période de discours de 5 minutes. (S); période de 5 minutes Math (M).
Figure 2. Représentant les scores d'anxiété état. Remarque: score d'anxiété Etat calculée à partir de 20 Iten mesure de l'anxiété état de l'inventaire d'anxiété Etat Trait (STAI) les scores reflètent Représentant données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature..
Figure 3. Représentant données de fréquence cardiaque Remarque:.. Fréquence cardiaque en battements par minute (BPM) Valeurs représentatives reflètent les données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature.
Figure 4. Représentant des données de cortisol salivaire Note:.. Les valeurs représentant la concentration de cortisol dans les UL / DL refléter les données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature.
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Discussion
Dans cet article, nous avons démontré la façon de mener le test de stress Trèves social dans un volontaire sain. La TSST est un facteur de stress de laboratoire normalisées sociale qui induit une augmentation robuste et fiable à psychologiques, des mesures physiologiques et neuro-endocrinien. La TSST est une alternative utile aux facteurs de stress physiques comme lors du test presseur froid ou la marche sur tapis roulant, et reproduit le stress psychologique, plus naturaliste de la performance dans la présence d'un public d'évaluation.
De nombreux aspects du TSST peuvent être modifiés pour répondre aux besoins des divers programmes de recherche. Les points de mesure en temps démontré dans cet article représentent un minimum de prélèvement. De nombreuses expériences peuvent nécessiter des points de prélèvement supplémentaires et des mesures pour mieux saisir les changements en réponse au stress. La longueur de l'anticipation, la parole et les périodes de maths (allant généralement de 5-10 minutes), l'inclusion ou l'omission de la période de récupération (s), et la compositionde l'audience d'évaluation lors du discours et des représentations mathématiques (allant d'une caméra vidéo à un panel d'évaluateurs) peut être modifié. La TSST peut être administré à des groupes ainsi que des particuliers. 7 mesures supplémentaires de HPA-ou SAM-axe d'activation, l'activité du système nerveux sympathique et parasympathique, ou psychologique d'auto-évaluation du stress peuvent être inclus pour évaluer la réponse à la TSST. Par exemple, certains groupes de recherche peut trouver utile de mesurer la variabilité du rythme cardiaque, la réponse électrodermale, pression artérielle, à un sursaut ou une réponse clin d'œil, ou des changements dans la température du corps en réponse à la TSST. Pour un examen des mesures couramment utilisées pour évaluer l'activité du système nerveux autonome, s'il vous plaît voir Mendes, 2009 7. Récemment, certains groupes de recherche ont également commencé à étudier les changements dans la réponse immunitaire à l'TSST. 8 Beaucoup d'options pour évaluer la réponse psychologique à la TSST sont également disponibles (par exemple, le Profile of Mood States, visuelle analoéchelles GUE, ou de type Likert cotes de stress, d'anxiété ou de détente).
Les différences dans la réponse individuelle à la TSST sont une préoccupation importante lors de l'utilisation de ce protocole. Dans des échantillons d'adultes sains, la TSST a été signalé à augmenter les niveaux de cortisol salivaire deux à trois fois dans environ 70-80% des participants, cependant les réponses varient largement entre les individus. 1 Les chercheurs ont documenté les effets de l'âge, le sexe 1, 9, 10 naissances poids, 11 résilience / l'attachement de style, 12, 13 abus dans l'enfance, l'éducation 14, 15 traits de personnalité, 16 utilisation de la nicotine / alcool / caféine une ou l'utilisation de médicaments (en particulier sédatifs, anxiolytiques ou à base d'hormones des contraceptifs), 17, 18 cognitives thérapie comportementale, 19 méditation de la compassion, 8 et la présence de la musique 20 sur la réponse TSST populations en bonne santé. Récemment, des chercheurs ont suggéré mesures qui sont prises avant une période d'attente avant la TSST sont importantes et peuvent révéler des informations sur la réactivité au stress individuel. 21 Pour une discussion plus approfondie des différences individuelles dans l'évaluation des hormones salivaires, et aperçu de l'utilisation de l'évaluation des hormones salivaires dans les neurosciences sociales , voir Schultheiss et Stanton, 2009. 22 Pour une présentation plus détaillée des différences individuelles dans la performance TSST, voir Kudielka et al., 2009. 23
En plus de différences individuelles, le cortisol est soumise à des fluctuations du rythme circadien, avec des niveaux élevés le matin puis diminuant à travers la journée. Si des changements de cortisol sera utilisée comme une mesure en réponse à la TSST, il est important de recueillir des échantillons prélevés aux points chronologiques cohérentes pour une analyse précise et à éviter de confondre les changements induits par le cortisol TSST avec la réponse du cortisol qui survient au réveil le matin.
ent "> Bien de nombreux rapports ont porté sur l'utilisation du TSST pour étudier la réponse au stress en bonne santé, les populations adultes, ce protocole est approprié pour une utilisation dans des populations cliniques et a été adapté pour une utilisation avec des enfants. 24 Ce protocole peut contribuer à la compréhension de l'importance rôle des diverses voies biologiques impliquées dans les troubles liés au stress ou à la variabilité du développement de la réponse au stress.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Pas de conflits d'intérêt déclarés.
Acknowledgments
Merci à Jessica Ottmar des suggestions protocole et contributions à des données représentatives. Un merci spécial à Sabrina Blackledge, Lauren Kohoutek et Kerisa Shelton pour démontrer ce protocole.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
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