Summary
Questo articolo descrive un protocollo per indurre stress psicologico nei partecipanti, che consente ai ricercatori di misurare psicologico, le risposte fisiologiche e neuroendocrina allo stress all'interno di singoli partecipanti o tra i gruppi.
Abstract
Questo articolo viene illustrato un protocollo di stress psicologico per l'utilizzo in un ambiente di laboratorio. Protocolli che permettono ai ricercatori di studiare i percorsi biologici della risposta allo stress in salute e malattia sono fondamentali per il progresso della ricerca in stress e ansia. 1 Sebbene esistano numerosi protocolli per indurre risposta allo stress in laboratorio, molti trascurano di fornire un contesto naturalistico o di integrare gli aspetti di stress sociale e psicologico. Dei protocolli di stress psicologico, meta-analisi suggerisce che la Social Stress Test Trier (TSST) è il protocollo più utile ed opportuno standardizzata per lo studio della reattività allo stress ormonale. 2 Nella descrizione originale del TSST, i ricercatori hanno cercato di progettare e valutare una procedura in grado di indurre una risposta affidabile di stress nella maggior parte dei volontari sani. 3 Questi ricercatori hanno trovato aumenti della frequenza cardiaca, pressione sanguigna e lo stress endocrino diversi markers in risposta al TSST (un fattore di stress psicologico) rispetto ad una iniezione di soluzione salina (un fattore di stress fisico) 3. Sebbene il TSST è stato modificato per soddisfare le esigenze dei vari gruppi di ricerca, si compone in genere di un periodo di attesa dopo l'arrivo, parola di anticipazione preparazione, la performance vocale e verbale aritmetica periodi di prestazioni, seguito da uno o più periodi di recupero. Il TSST richiede ai partecipanti di preparare e consegnare un discorso, e verbalmente rispondere a un problema di aritmetica impegnativo in presenza di un pubblico socialmente valutativa 3. Valutazione sociale e incontrollabilità sono stati identificati come componenti chiave di induzione dello stress dal TSST. 4 In uso per oltre un decennio, l'obiettivo del TSST è di indurre una risposta allo stress sistematicamente al fine di misurare differenze di reattività, l'ansia e l'attivazione dell'asse ipotalamo-ipofisi-surrene (HPA) o simpatico-surrenale-midollare (SAM) asse durante il compito 1. Researcsuo genere valutare i cambiamenti in auto-riferito ansia, misure fisiologiche (ad esempio frequenza cardiaca), e / o indici neuroendocrini (per esempio il cortisolo, l'ormone dello stress) in risposta al TSST. Molti ricercatori hanno adottato per il campionamento salivare marcatori di stress come il cortisolo e alfa-amilasi (un marker di attivazione del sistema nervoso autonomo) come alternativa al prelievo di sangue per ridurre lo stress confondenti di sangue tecniche di raccolta. In aggiunta ai cambiamenti sperimentato da un individuo completando il TSST, i ricercatori possono confrontare le modifiche tra diversi gruppi di trattamento (ad esempio clinico campioni di controllo rispetto ai sani) o l'efficacia di interventi di riduzione dello stress 1.
Protocol
1. Impostare
- Tutte le ricerche devono essere approvate dal Consiglio appropriato Institutional Review o revisione umana soggetti comitato prima della raccolta dei dati.
- Idealmente, due camere dovrebbero essere disponibili per condurre il TSST. Una confortevole sala d'attesa dovrebbero essere a disposizione dei partecipanti prima di iniziare la TSST e durante i periodi di recupero. Una sala colloquio separato deve essere usato durante la preparazione del discorso, la performance vocale e porzioni di matematica del TSST di introdurre novità e uncontrolability.
- Disporre sala delle udienze in modo che il partecipante si troverà ad affrontare intervistatori confederate e video posizione o apparecchiature di registrazione audio nel campo visivo del partecipante. Camici dovrebbero essere disponibili per gli intervistatori da indossare durante la TSST per aumentare lo stress durante la TSST. Istruire gli intervistatori a mantenere il contatto visivo con i partecipanti e di astenersi dal fare emotive espressioni facciali durante la TSST.
- Considerare attentamente °e domanda di ricerca (s) quando si seleziona misure dipendente. Linee guida per l'analisi e la pubblicazione di varie metrature di risposta allo stress sono forniti da diverse fonti (linee guida per la pubblicazione e l'analisi delle misure psicofisiologiche sono forniti dalla Società per la Ricerca psicofisiologica: http://www.sprweb.org/journal/index. cfm # guidelines ). 5 Consultazione di queste risorse durante la progettazione di esperimenti è raccomandato.
- Impostare tutte le attrezzature necessarie per la registrazione fisiologica, psicologica o risposte endocrine al TSST. Questa apparecchiatura può includere (ma non solo) elettrodi e apparecchiature elettroniche e / o software per registrare la frequenza cardiaca, la reattività cardiovascolare, conduttanza cutanea o una risposta, batter d'occhio, la contrazione muscolare / tono, frequenza respiratoria, carta e matita o versioni elettroniche di strumenti psicologici come l'ansia di tratto Stato Inventory; 6 tubi e materiali per la raccolta di altri campioni di urina, sangue o saliva;. o apparecchiature di registrazione video Per questa dimostrazione verrà utilizzato tre derivazioni dell'elettrocardiogramma (ECG) elettrodi per misurare la frequenza cardiaca durante il TSST, e la somministrazione ripetuta del Stato Trait Anxiety Inventory per misurare la risposta psicologica prima e dopo l'evento stressante. Ci si avvale di un sistema di base di registrazione progettato per misurare le risposte fisiologiche (Biopac MP36 di sistema) per registrare la frequenza cardiaca.
- Se i campioni di sangue (piuttosto che saliva) saranno raccolti durante l'esperimento, gli sforzi per minimizzare il dolore e il disagio durante la raccolta deve essere fatta. Procedure di raccolta del sangue può introdurre ulteriori stress fisico o psicologico, la risposta alla confusione TSST.
- Quando il partecipante arriva, loro il benvenuto al laboratorio. Ottenere il consenso informato ed il sedile del partecipante comodamente.
- Raccogliere dati demografici, le informazioni di screening o supplemisure arrivo nale che sono richiesti dal vostro esperimento. Verificare che il partecipante non ha consumato cibi o bevande (a parte l'acqua), nell'ultima ora se la raccolta misurazioni del cortisolo. Un breve periodo di digiuno è consigliato se vi sarà la raccolta di campioni di saliva per l'analisi. Le variazioni di pH associati a cibi acidi o bevande o di contaminazione visibile può interferire con la misurazione accurata dei marcatori salivari. Lo screening tossicologico delle urine può essere necessaria se le misure di interesse possono essere contaminati da farmaci o altri metaboliti. Informazioni sui fattori che possono influire sulla risposta allo stress (ad esempio farmaci, malattie, sonno, eventi stressanti recenti, fobia sociale) dovrebbe essere considerato quando i partecipanti screening.
2. Misure pre-stress
- Istruire il partecipante ad aspettare comodamente per 45 minuti nella sala d'attesa. Si può scegliere di fornire al partecipante con materiale di lettura, come riviste contenenti emonalmente contenuto indipendente, o un'altra attività emotivamente neutro durante questo periodo.
- Dopo il periodo di 45 minuti di attesa, amministrare il Trait Anxiety Inventory Stato per valutare lo stress pre-ansia. 6 In alternativa, altri strumenti che sono progettati per valutare le variazioni dello stato di stress, ansia o rilassamento possono essere somministrati (ad esempio scale visive analogiche).
- Raccogliere un campione "pre-stress" saliva. Istruire i partecipanti a sciacquare la bocca con acqua. Dare al partecipante una sezione 5-10 cm di cannuccia e un ambiente pulito, fiala monouso in polipropilene 2,0 ml. Istruire il partecipante di inclinare la testa in avanti per consentire la saliva di piscina sul pavimento della bocca poi passare la saliva attraverso la cannuccia nel flaconcino. Raccogliere circa 1,5-2,0 ml di saliva dal partecipante. In alternativa, la saliva possono essere raccolti usando assorbenti stoppino dentale (o materiale simile) e istruire i partecipanti a masticare o saturare il materiale con la saliva. Se possibile, lasciate la stanza di fornire al partecipante con la privacy. Etichetta e conservare tutti i campioni di saliva a -20 ° C nel più breve tempo possibile.
- Registrare 5 minuti di misurazioni fisiologiche pre-stress.
3. Il TSST
- Se si prevede di utilizzare una stanza separata intervista (per aumentare gli effetti dello stress del TSST), portare il partecipante dalla sala d'attesa nella sala colloqui.
- Per iniziare TSST il periodo di preparazione vocale, leggere il seguente script al partecipante: "Questa è la parte di preparazione discorso del compito, si sta per preparare mentalmente un discorso di cinque minuti che descrivono perché vi sarebbe un buon candidato per il tuo lavoro ideale. Il suo discorso sarà videoregistrata e rivista da un panel di giudici addestrati nel parlare in pubblico. Hai dieci minuti per preparare il vostro tempo e comincia adesso ".
- Registrare le misurazioni fisiologiche durante il periodo di 10 minuti discorso di preparazione. Impostare un timer digitale per 10 minuti e lasciare la stanza. Dopo 10 minuti, tornate alla stanza indossa un camice da laboratorio. Leggi il seguente script al partecipante: "Questa è la parte vocale del compito Siete a un discorso che descrive il motivo per cui sarebbe un buon candidato per il tuo lavoro ideale si deve parlare per l'intero il periodo di cinque minuti di tempo... il tempo comincia adesso ". La videocamera prop dovrebbe essere ora attivato, per aumentare valutativa / prestazioni stress.
- Registrare le misurazioni fisiologiche durante i 5 minuti di discorso prestazioni. Se il partecipante smette di parlare durante il discorso, le consenta di rimanere in silenzio per 20 secondi. Se lui o lei non riprende parlando, richiesta ai partecipanti di continuare a parlare, insegnando loro: "Hai ancora tempo rimanente."
- Al termine dei 5 minuti di discorso di prestazioni, leggere il seguente script al partecipante: "Durante gli ultimi cinque minuti parte la matematica di questo compito vi sarà chiesto di sottrarre in sequenza il numero 13 da 1.022 Potrai verbale.Ly segnalare le vostre risposte a voce alta, e sarà chiesto di ricominciare da 1.022 se viene commesso un errore. . Vostro tempo comincia adesso "Se il partecipante fa un errore, li prompt con:" Questo non è corretto, si prega di ricominciare da 1.022 "Impostare un timer digitale per 5 minuti..
- Registrare le misurazioni fisiologiche durante i 5 minuti di matematica prestazioni.
- Al termine del periodo di matematica prestazioni del TSST, raccogliere un campione "post-stress" saliva.
- Amministrare lo stress post-Trait Anxiety Inventory Stato.
4. Dopo lo stress di recupero Misure
- Ritorna partecipanti alla stanza originale attesa. Durante il periodo di recupero prima, istruire il partecipante ad aspettare comodamente per 20 minuti. Impostare un timer digitale per 20 minuti e lasciare la stanza.
- Ritorna alla sala d'attesa dopo 20 minuti e raccogliere un "recupero 1" campione di saliva.
- Durante il periodo di recupero secondo, istruire il partecipante di aspettare ancora comodamente per 20 minuti. Impostare un timer digitale per 20 minuti e lasciare la stanza.
- Ritorna alla sala d'attesa dopo 20 minuti e raccogliere un "recupero 2" campione di saliva.
- Istruire i partecipanti di completare il tratto "recupero" State Anxiety Inventory.
- Debriefing del partecipante per quanto riguarda la vera natura dell'esperimento. Informa il partecipante che la loro performance non è stata registrata e che nessuna analisi del loro linguaggio o le prestazioni di matematica sarà condotta. Spiegate ai partecipanti che i compiti con la quale sono stati presentati sono stati straordinariamente difficile, e non riflettere sulle attitudini del partecipante o abilità.
5. Analisi dei dati
- Per analizzare le misure psicologiche, il punteggio di ogni Trait Anxiety Inventory Stato dal pre-stress, post-stress e il tempo di recupero punti 6.
- Per analizzare le misure fisiologiche, calcolare un punteggio medio della frequenza cardiaca per ciascuno dei 5 minuti di "stress pre", "preparazione del discorso", "performance vocale" e "math "periodi del TSST. In alternativa, calcolare i punteggi medi per ogni minuto della TSST o della frequenza cardiaca misura in punti tempo discreto durante il TSST.
- Per analizzare le misure neuroendocrini, i campioni di test salivare per la concentrazione dell'ormone usando i kit EIA disponibile in commercio.
6 Opzionale:. Aggiuntive cortisolo salivare Information Protocol Assay (riprodotto da Salimetrics salivari inserire kit dosaggio del cortisolo)
- Portare tutti i reagenti del kit test salivari a temperatura ambiente.
- Preparare il tampone di lavaggio in base alle istruzioni del kit.
- Determinare layout del pannello e pipettare 25 ml di standard e controlli nei pozzetti in duplicato.
- Campioni di saliva disgelo, vortex e centrifugare a 1.500 XG (@ 3.000 rpm) per 15 minuti.
- Pipettare 25 ml di liquido chiaro da campioni centrifugati in pozzetti in lamiera (in duplice copia).
- Preparare enzima coniugato e pipettare 200 ul in tutti i pozzetti. Mescolare piastra per 5 minuti a 500 rpm e incubare per altri 55 minuti.
- Lavare e asciugare la piastra di 4 volte con tampone di lavaggio.
- Aggiungere 200 ul tetrametilbenzidina (TMB) in ogni pozzetto utilizzando una pipetta multicanale.
- Mescolare la piastra per 5 minuti a 500 rpm e incubare al buio per altri 25 minuti.
- Aggiungere 50 ul di soluzione di stop a ogni bene e mescolare per 3 minuti a 500 rpm per fermare le reazioni.
- Pulire il fondo piatto pulito e leggere la piastra in un lettore di piastre a 450 nm entro 10 minuti dall'aggiunta della soluzione di stop.
- Per calcolare la concentrazione di cortisolo, calcolare la densità media ottica per tutti i pozzetti duplicati. Sottrarre la densità ottica media dei pozzi legame non specifico dalla densità ottica media dello zero, standard, controllo e pozzetti dei campioni.
- Calcolare il tasso di legame (B / Bo) per ogni controllo standard e campione dividendo la densità media ottico di questi pozzi (B) dal Averetà densità ottica dei pozzi zero (Bo). Determinare la concentrazione dei controlli e dei campioni per interpolazione utilizzando un software in grado di logistica.
7. Rappresentante dei risultati:
I dati qui presentati rappresentante è stato compilato da una revisione della letteratura e due studi che sono stati condotti nel nostro laboratorio durante il pomeriggio con i partecipanti adulti maschi sani. Questi dati sono destinati a rappresentare circa i risultati che potrebbero essere trovati utilizzando il protocollo presentato in questo articolo.
Questo protocollo TSST (Figura 1) induce aumenti di auto-riferito ansia (come misurata dal State Trait Anxiety Inventory; Figura 2), la frequenza cardiaca (Figura 3), e le concentrazioni di cortisolo salivare (Figura 4). Il protocollo sperimentale illustrato nella figura 1 è pensato per fornire un esempio di come varie misure potrebbe essere fatto durante una sessione di raccolta dati con il TSST. I tempi di MISUREts e l'inclusione di diverse misure saranno dettate dalla domanda di ricerca specifici. Se si utilizza un intervento che ha lo scopo di ridurre l'ansia e / o la risposta allo stress, aumenta smussati o attenuati in queste misure sono previsti.
Figura 1. Protocollo sperimentale Nota: Stress Test Trier sociale (TSST); State Trait Anxiety Inventory (STAI), 5 minuti di stress Pre (PS), 10 minuti di stress anticipatoria (preparazione vocale) (AS), 5 minuti di discorso. (S), 5 minuti di matematica (M).
Figura 2. Rappresentante punteggi ansia di stato. Nota: Ansia punteggio calcolato Stato dal 20-Iten misura ansia di stato di Trait Anxiety Inventory Stato (STAI) punteggi Rappresentante riflettere i dati raccolti nel nostro laboratorio e pubblicati in letteratura..
Figura 3. Rappresentante dati di frequenza cardiaca Nota:.. La frequenza cardiaca in battiti per minuto (BPM) valori rappresentativi riflettere i dati raccolti nel nostro laboratorio e pubblicati in letteratura.
Figura 4. Rappresentante dei dati cortisolo salivare Nota:.. Concentrazione di cortisolo in UL / DL valori rappresentativi riflettere i dati raccolti nel nostro laboratorio e pubblicato in letteratura.
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Discussion
In questo articolo abbiamo dimostrato come condurre la Social Stress Test Trier in un volontario sano. Il TSST è un fattore di stress laboratorio standardizzato sociale che induce un aumento robusto e affidabile in psicologici, misure fisiologiche e neuroendocrini. Il TSST è una valida alternativa a fattori di stress fisici, durante i test pressa a freddo a piedi o tapis roulant, e riproduce lo stress psicologico più naturalistica delle prestazioni in presenza di un pubblico valutativa.
Molti aspetti del TSST può essere modificato per soddisfare le esigenze dei vari programmi di ricerca. I punti di misurazione del tempo ha dimostrato in questo articolo rappresenta un minimo di campionamento. Molti esperimenti possono richiedere ulteriori punti di campionamento e misure di cogliere meglio i cambiamenti in risposta allo stress. La lunghezza del anticipatori, della parola e periodi di matematica (in genere vanno da 5-10 minuti), l'inclusione o l'omissione del periodo di recupero (s), e la composizionedel pubblico durante il discorso valutativo e le performance di matematica (che vanno da una videocamera ad un panel di valutatori) può essere modificato. Il TSST può essere somministrato a gruppi e singoli individui. 7 misure aggiuntive di HPA-asse o SAM-attivazione, attività del sistema nervoso simpatico e parasimpatico, o psicologico self-report di stress possono essere usate per valutare la risposta al TSST. Per esempio, alcuni gruppi di ricerca può essere utile per misurare la variabilità della frequenza cardiaca, attività elettrodermica, pressione arteriosa, spaventi e batter risposta dell'occhio, o cambiamenti nella temperatura corporea in risposta al TSST. Per una revisione delle misure comunemente utilizzati per valutare l'attività del sistema nervoso autonomo, vedere Mendes, 2009. 7 Recentemente, alcuni gruppi di ricerca hanno iniziato a studiare le modifiche nella risposta immunitaria al TSST. 8 molte opzioni per la valutazione della risposta psicologica al TSST sono inoltre disponibili (ad esempio il profilo degli Stati Mood, visivo analoscale gue, o tipo Likert rating di stress, ansia o rilassamento).
Le differenze nella risposta individuale al TSST sono un aspetto importante quando si usa questo protocollo. Nei campioni di adulti sani, la TSST è stato segnalato per aumentare i livelli di cortisolo salivare 2-3 volte in circa il 70-80% dei partecipanti, ma le risposte variano molto da individuo a individuo. 1 I ricercatori hanno documentato gli effetti di età, 1 sesso, 9, 10 nascita peso, 11 resilienza / stile di attaccamento, 12, 13 abusi infantili, 14 all'istruzione, 15 tratti della personalità, 16 l'uso di nicotina / alcol / caffeina 1 o uso di farmaci (in particolare sedativi, ansiolitici o a base di ormoni contraccettivi), 17, 18 cognitive la terapia comportamentale, 19 meditazione compassione, 8 e la presenza di music 20 sulla risposta TSST in popolazioni sane. Recentemente, i ricercatori hanno suggerito misure che vengono prese prima di un periodo di attesa prima che il TSST sono importanti e possono rivelare informazioni sulla reattività allo stress individuale. 21 Per una discussione più approfondita delle differenze individuali nella valutazione degli ormoni salivari, e una panoramica dell'uso di ormoni salivari a valutazione sociale delle neuroscienze , vedere Schultheiss & Stanton, 2009. 22 Per una presentazione più dettagliata delle differenze individuali in termini di prestazioni TSST, vedere Kudielka et al., 2009. 23
Oltre alle differenze individuali, il cortisolo è soggetto a fluttuazioni circadiano, con alti livelli di mattina poi diminuire nel corso della giornata. Se le modifiche cortisolo saranno utilizzati come misura in risposta al TSST, è importante raccogliere campioni in momenti coerenti per l'analisi accurata e per evitare confusione TSST cambiamenti indotti di cortisolo con la risposta del cortisolo che si verifica al risveglio al mattino.
ENT "> Anche se molti rapporti si sono concentrati sull'uso della TSST per studiare risposta allo stress in soggetti sani, popolazioni adulte, questo protocollo è appropriato per l'uso in popolazioni cliniche ed è stato adattato per essere utilizzato con i bambini. 24 Questo protocollo può contribuire alla comprensione importanti sul ruolo delle varie vie biologiche coinvolte nella disturbi legati allo stress o variabilità dello sviluppo della risposta allo stress.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Acknowledgments
Grazie a Jessica Ottmar per i suggerimenti protocollo e contributi per i dati rappresentativi. Un ringraziamento speciale a Sabrina Blackledge, Lauren Kohoutek e Kerisa Shelton per dimostrare questo protocollo.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
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