Summary
В этой статье описывается протокол за склонение психологического стресса у участников, что позволяет исследователям для оценки психологических, физиологических и нейроэндокринные реакции на стресс в рамках единой участниками или между группами.
Protocol
1. Создавать
- Все исследования должны быть утверждены соответствующие институциональные наблюдательного совета или человеческой обзор предметов комитета до сбора данных.
- В идеале, две комнаты должны быть доступны для проведения TSST. Удобный зал ожидания должны быть доступны для участников до начала TSST и во время восстановления периоды. Отдельная комната интервью следует применять во время подготовки речи, речи производительности и математику части TSST ввести новизну и uncontrolability.
- Организовать интервью комнату так, что участник будет сталкиваться сообщник интервьюеров и позиция видео или аудио записывающей аппаратуры на поля зрения участника. Лаборатория пальто должны быть доступны для интервьюеров носить во время TSST увеличить стресс во время TSST. Поручить интервьюерам поддерживать зрительный контакт с участниками и воздерживаться от эмоциональных выражений лица во время TSST.
- Тщательно рассмотрите йэлектронной исследования вопрос (ы) при выборе зависимых измерений. Руководящие принципы для анализа и публикации различных измерений стрессовой реакции обеспечивается несколькими источниками (руководящие принципы для публикации и анализа психофизиологических меры предоставляются Обществом Психофизиологические исследования: http://www.sprweb.org/journal/index. кубических футов в минуту принципов # ) 5. Консультации этих ресурсов во время планирования эксперимента рекомендуется.
- Устанавливает все оборудование, необходимое для записи физиологических, психологических или эндокринные ответы на TSST. Это оборудование может включать (но не ограничиваясь) электроды и электронного оборудования и / или программное обеспечение для записи частоты сердечных сокращений, сердечно-сосудистой реактивности, проводимость кожи или ответ, глаза мигают, сокращение мышц / тона, частоту дыхания, бумаги и карандаш или электронные версии психологические инструменты, такие как состояние тревоги черт Inventory, 6 труб и других материалов, коллекция для мочи, крови или слюны;. или оборудования, запись видео Для этой демонстрации, мы будем использовать три привести электрокардиограмму (ЭКГ) электроды для измерения частоты сердечных сокращений во время TSST, и повторное введение Государство тревожности инвентаризации для оценки психологического ответа до и после стресса. Мы будем использовать основной системой записи, предназначенный для измерения физиологических реакций (BioPac MP36 системы) для записи частоты сердечных сокращений.
- Если образцы крови (а не слюна) будут собраны в ходе эксперимента, усилия, чтобы минимизировать боль и страдания во время сбора должно быть сделано. Процедуры сбора крови можно ввести дополнительные физические или психологические стрессы, смешанные ответ на TSST.
- Когда участник приходит, приветствовать их в лаборатории. Получить информированное согласие и место участника комфортно.
- Сбор демографической информации, отбор информации или additioNAL меры прибытия, которые необходимы ваш эксперимент. Убедитесь, что участник не потребляли пищу или напитки (кроме воды) в последний час, если сбор кортизола измерений. Короткий период поста рекомендуется, если вы будете сбора слюны на анализ. Изменения рН связано с кислой пищи или питья или видимых загрязнений может помешать точное измерение слюнных маркеров. Скрининга мочи токсикологии может потребоваться, если меры интересов могут быть загрязнены с помощью лекарств или других метаболитов. Информация о факторах, которые могут повлиять на стрессовую реакцию (например, лекарства, болезни, сон, недавние напряженные события, социальные фобии), также должны рассматриваться при отборе участников.
2. Предварительное напряжение Измерения
- Попросите участников ждать комфортно в течение 45 минут в зал ожидания. Вы можете предоставить участника с материалами для чтения, такие как журналы, содержащие эмоtionally нейтральным содержанием, или иной эмоционально-нейтральной деятельности в этот период.
- После 45-минутного периода ожидания, администрировать состояние тревоги черт инвентаризации для оценки предварительно стресс тревога. 6 Кроме того, другие инструменты, которые предназначены для оценки изменений состояния стресса, тревоги или релаксации может быть введен (например, визуальной аналоговой шкалы).
- Сбор "до-стресс" образец слюны. Попросите участника полощут рот водой. Дайте участник 5-10 см раздел питьевой соломки и чистый, одноразовый 2,0 мл полипропиленовые пробирки. Попросите участников, чтобы наклонить голову вперед, чтобы слюна объединить на полу рот затем передать слюной через солому в флаконе. Сбор около 1,5-2,0 мл слюны из участников. Кроме того, слюна может быть собрана с помощью абсорбирующих стоматологических фитиль (или подобный материал) и инструктаж участников жевать или насытить материал со слюной. Если позваны, выйти из комнаты, чтобы обеспечить участников в личную жизнь. Этикетка и хранить все слюны при температуре -20 ° С, как можно скорее.
- Запись 5 минут предварительного напряжения физиологических измерений.
3. TSST
- Если вы будете использовать отдельное помещение интервью (для увеличения напряжения эффекты TSST), довести участника из зала ожидания в комнату для интервью.
- Для начала TSST период подготовки речи, читайте следующий сценарий, чтобы участник: "Это часть речи подготовке задачу: вы мысленно подготовить пятиминутные речи, описывающий, почему вы были бы хорошим кандидатом для идеальной работы. Ваша речь будет записаны на видео и рассматриваются жюри обучение в публичных выступлениях. У вас есть десять минут на подготовку и ваше время начинается сейчас ".
- Запись физиологических измерений в течение 10-минутного периода подготовки речи. Установить цифровой таймер на 10 минут и выйти из комнаты. Через 10 минут вернуться в комнату носить халат. Прочитайте следующий сценарий для участников: «Это речь часть задачи Вам предстоит выступить с речью, описывающий, почему вы были бы хорошим кандидатом для вашей идеальной работы Вы должны говорить за весь пятиминутный период времени... Ваше время начинается сейчас ". Опора видеокамера должна быть включена в настоящее время, повысить оценочную / производительность стресса.
- Запись физиологических измерений в течение 5-минутного периода исполнения речи. Если участник перестает говорить во время речи, позволить ему или ей хранить молчание в течение 20 секунд. Если он или она не возобновляет говоря, строки участник продолжать говорить, поручив им: "Вы все еще есть время, оставшееся".
- В конце 5-минутного периода производительность речь, читать следующий сценарий, чтобы участник: «В течение последних пяти минут математике часть этой задачи вам будет предложено последовательно вычитать число 13 из 1022 Вы словесные.Ly докладе ваши ответы вслух, и попросят начать заново с 1022, если допущена ошибка. . Ваше время начинается сейчас "Если участник допускает ошибку, оперативное их:" Это неправильно, пожалуйста, начать заново с 1022 "Установить цифровой таймер на 5 минут..
- Запись физиологических измерений в течение 5-минутного периода производительность математике.
- В конце периода математике производительность TSST, собирать "после стресса" образец слюны.
- Администрирование пост-напряженного состояния тревожности инвентаризации.
4. После стресса Измерения Восстановление
- Возвращение участников оригинального зал ожидания. В течение первого периода восстановления, инструктировать участников ждать комфортно в течение 20 минут. Установить цифровой таймер на 20 минут и выйти из комнаты.
- Вернуться в зал ожидания после 20 минут и собирают "восстановления 1" образец слюны.
- В течение второго периода восстановления, инструктировать участников снова ждать комфортно в течение 20 минут. Установить цифровой таймер на 20 минут и выйти из комнаты.
- Вернуться в зал ожидания после 20 минут и собирают "Восстановление 2" образец слюны.
- Попросите участников для завершения "восстановления" Государственный тревожности инвентаризации.
- Подведение итогов участника относительно истинного характера эксперимента. Информ участников, что их работа не была записана и что ни анализ их речи и математике производительность будет проводиться. Объясните, что участник задач, с которыми они были представлены необоснованно сложным и не размышлять о способности участника или способности.
5. Анализ данных
- Для анализа психологических мер, оценка каждого государства Тревога черт инвентаризации с предварительно стресс, после стресса и указывает время восстановления 6.
- Чтобы проанализировать физиологические показатели, вычислить средний балл сердечного ритма для каждого из 5-ти минутах "до стресса", "речь подготовка", "речь производительность" и "мАТН "периоды TSST. Кроме того, вычислить средние баллы за каждую минуту TSST или мер курсов сердце в дискретных точках времени, в течение TSST.
- Для анализа нейроэндокринных меры, пробы слюны образцов для концентрации гормона с использованием коммерчески доступных комплектов ОВОС.
6 Дополнительно:. Дополнительная слюнных Кортизол Пробирной Информация о протоколах (воспроизводится из Salimetrics слюнных вставить анализа комплекта кортизола)
- Приведите все слюнные реагентов в наборе анализа до комнатной температуры.
- Подготовка промывочного буфера в соответствии с комплектом инструкций.
- Определить расположение пластин и пипеткой 25 мкл стандартов и контролей в соответствующие лунки в двух экземплярах.
- Образцы слюны оттепели, вихревые и центрифуге при 1500 XG (@ 3000 оборотов в минуту) в течение 15 минут.
- Внесите 25 мкл прозрачная жидкость от центрифугируют образцы в соответствующие лунки в пластине (в двух экземплярах).
- Подготовка ферментного конъюгата и пипетки 200 мкл во все лунки. Смешайте пластину в течение 5 минут при 500 оборотах в минуту и инкубировать дополнительные 55 минут.
- Вымойте и промокните пластины 4 раза промывочным буфером.
- Добавить 200 мкл тетраметилбензидина (ТМБ) раствора в каждую лунку помощью многоканальной пипетки.
- Смешайте пластину в течение 5 минут при 500 оборотах в минуту и инкубировать в темноте в течение дополнительных 25 минут.
- Добавить 50 мкл решение остановиться в каждую лунку и перемешать в течение 3 минут при 500 оборотов в минуту, чтобы остановить реакцию.
- Протрите нижнюю пластину чистой и читать пластины в ридер при 450 нм в течение 10 минут после остановки решения.
- Для расчета концентрации кортизола, вычислить среднюю оптическую плотность для всех дубликатов скважин. Вычтите средней оптической плотности неспецифического связывания скважин средней оптической плотности нуль, стандарта, контроля и образца скважин.
- Рассчитать процент оценка (B / Bo) для каждого стандарта, контроля и образца путем деления средней оптической плотности этих скважин (В), средняявозраст оптической плотности нулевого скважин (Бо). Определение концентрации контролей и образцов путем интерполяции использованием программного обеспечения, способного логистики.
7. Представитель Результаты:
Репрезентативные данные, представленные здесь, собраны из обзора литературы и двух исследований, проведенных в нашей лаборатории во второй половине дня с здорового взрослого мужчины участников. Эти данные предназначены для примерно представляют результаты, которые можно найти, используя протокол, представленные в этой статье.
Это TSST протокола (рис. 1) индуцирует рост самооценки тревоги (по данным инвентаризации Тревога черт государства; рис. 2), частота сердечных сокращений (рис. 3), и слюнных концентрации кортизола (рис. 4). Экспериментальный протокол показано на рисунке 1 призван обеспечить один пример того, как различные измерения могут быть сделаны во время сеанса сбора данных с TSST. Сроки ИЗМЕРЕНИЕц и включения различных мер будет определяться конкретные вопросы исследования. При использовании вмешательство, которое предназначено, чтобы уменьшить беспокойство и / или стрессовой реакции, притупляется или ослабленный рост этих мер предсказать.
Рисунок 1. Экспериментальный протокол Примечание: Трир социальной стресс-тест (TSST), Государственная тревожности инвентаризации (СТАИ); 5-ти минутах Предварительно период стресса (ПС), 10-минутный Досрочное период стресса (речь подготовки) (AS), 5-минутной речью период. (S), 5-минутного периода Math (М).
Рисунок 2. Представитель оценки состояния тревоги. Примечание: оценка состояния тревоги рассчитывается с 20-Итен тревожности мера государства тревожности инвентаризации (СТАИ) Представитель оценки отражают данные, собранные в нашей лаборатории и публикуются в литературе..
Рисунок 3. Представитель данных частоты сердечных Примечание:.. Частота сердечных сокращений в ударах в минуту (BPM), представитель ценности отражают данные, собранные в нашей лаборатории и публикуются в литературе.
Рисунок 4. Представитель слюнных данных кортизола Примечание:.. Кортизол концентрации в UL / DL значения представитель отражают данные, собранные в нашей лаборатории и публикуются в литературе.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этой статье мы продемонстрировали, как вести Трир социальной стресс-тест в здоровых добровольцев. TSST это стандартизированный лабораторный социального стресса, который вызывает прочный и надежный рост психологических, физиологических и нейроэндокринной мер. TSST является полезной альтернативой физического стресса на такие холодные испытания прижимной или беговой дорожке ходить, и воспроизводит более натуралистические психологический стресс производительности при наличии оценочных аудитории.
Многие аспекты TSST могут быть модифицированы, чтобы отвечать потребностям различных исследовательских программ. Время измерения точки продемонстрировали в этой статье, представляют собой минимум выборки. Многие эксперименты могут потребовать дополнительные точки отбора проб и измерения для лучшего захвата изменений в стрессовую реакцию. Длина упреждающий, речи и математике периоды (обычно в пределах от 5-10 минут), включение или пропуск восстановительного периода (ов), а также составоценочной аудитории во время речи и математике выступления (от видеокамеры к панели оценщики) может быть изменен. TSST могут быть введены группы, а также физических лиц. 7 Дополнительные меры ГПК-или SAM-оси активации, активность симпатической и парасимпатической нервной системы, или психологических самоотчетов стресса могут быть включены для оценки ответа на TSST. Например, в некоторых исследовательских групп может оказаться полезным для оценки вариабельности сердечного ритма, электродермальной ответ, кровяное давление, испуга или ответ глазом моргнуть, или изменения температуры тела в ответ на TSST. Для обзор мер, обычно используемые для оценки вегетативной нервной системы, см. Мендес, 2009 7. В последнее время некоторые исследовательские группы также начали исследовать изменения в иммунном ответе на TSST 8. Множество опций для оценки психологических ответ на TSST являются также доступны (например, Профиль настроения, визуальных аналоGUE весы, или Лайкерта типа рейтинги стресс, беспокойство или релаксация).
Различия в индивидуальной реакции на TSST являются серьезной проблемой при использовании этого протокола. У здоровых взрослых образцов, TSST, как сообщается, увеличение уровня кортизола слюны два-три раза в примерно 70-80% участников, однако ответов различаются у разных людей. 1 Исследователи зафиксировали влияние возраста, 1 пол, 9, 10 рождения веса, 11 устойчивости / стиль привязанности, 12, 13 жестокого обращения в детстве, 14 образование, 15 черт личности, 16 использование никотин / алкоголь / кофеин 1 или использования лекарственных средств (в частности, седативные средства, транквилизаторы или гормональные контрацептивы основе), 17, 18 когнитивных поведенческой терапии, 19 сострадания медитации, 8 и присутствие музыки 20 на TSST ответ в здоровой популяции. В последнее время исследователи полагают, измерения, которые приняты до периода ожидания перед TSST важны и могут раскрыть информацию о индивидуальной реактивности стресса. 21 Для более подробного обсуждения индивидуальных различий в оценке слюнных гормонов, и обзор использования слюнных оценки гормона в социальной неврологии см. Schultheiss & Stanton, 2009. 22 Для более детального представления индивидуальных различий в TSST производительности см. Kudielka и соавт., 2009 23.
В дополнение к индивидуальным различиям, кортизол подвергается циркадные колебания, с высоким уровнем утром, то снижение в течение дня. Если кортизола изменений будет использоваться в качестве меры по борьбе с TSST, важно, чтобы собрать образцы на последовательное моменты времени для точного анализа и, чтобы избежать смешанных TSST-индуцированной кортизола меняется с кортизола ответ, что происходит после пробуждения по утрам.
ЛОР "> Хотя многие доклады были сосредоточены на использовании TSST для изучения стресса у здоровых, взрослого населения, этот протокол является соответствующим для использования в клинических популяций и была адаптирована для использования с детьми. 24 Этот протокол может способствовать важно понимание Роль различных биологических механизмов, участвующих в связанных со стрессом расстройств или развития изменчивость стрессовую реакцию.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Спасибо Джессика Оттмар для протокола предложения и вклады в репрезентативных данных. Отдельное спасибо Сабрина Blackledge, Лорен Когоутека и Kerisa Шелтон для демонстрации этого протокола.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
References
- Kudielka, B. M., Hellhammer, D. H., Kirschbaum, C. Ten years of research with the Trier Social Stress Test - Revisited. Social Neuroscience: Integrating Biological and Psychological Explanations. Harmon-Jones, E., Winkielman, P. , Guilford Press. New York. (2007).
- Dickerson, S. S., Kemeny, M. E. Acute stressors and cortisol responses: A theoretical integration and synthesis of laboratory research. Psychol. Bull. 130, 355-391 (2004).
- Kirschbaum, C., Pirke, K., Hellhammer, D. H. The "Trier social stress test" - a tool for investigating psychobiological stress response in a laboratory setting. Neuropsychobiology. 28, 76-81 (1993).
- Gruenewald, T. L., Kemeny, M. E., Aziz, N., Fahey, J. L. Acute threat to the social self: shame, social self-esteem, and cortisol activity. Psychosom. Med. 66, 915-924 (2004).
- Mendes, W. B. Assessing autonomic nervous system activity. Methods in Social Neuroscience. Harmon-Jones, E., Beer, J. S. , Guilford Press. New York. 118-147 (2009).
- Spielberger, C. D., Gorsuch, R. L., Lushene, P. R., Vagg, P. R., Jacobs, A. G. Manual for the State-Trait Anxiety Inventory (Form Y). , Consulting Psychologists Press, Inc. Palo Alto. (1983).
- Dawans, B. von, Kirschbaum, C., Heinrichs, M. The Trier Social Stress Test for groups (TSST-G): A new research tool for controlled simultaneous social stress exposure in a group format. Psychoneuroendocrinology. 36, 514-522 (2011).
- Pace, T. W. W., Negi, L. T., Adame, D. D., Cole, S. P., Sivilli, T. I., Brown, T. D., Issa, M. J., Raison, C. L. Effect of compassion meditation on neuroendocrine, innate immune and behavioral responses to psychosocial stress. Psychoneuroendocrinology. 34, 87-98 (2010).
- Kirschbaum, C., Würst, S., Hellhammer, D. Consistent sex differences in cortisol responses to psychological stress. Psychosom. Med. 54, 648-657 (1992).
- Therrien, F., Drapeau, V., Lalonde, J., Lupien, S. J., Beaulieu, S., Dore, J., Tremblay, A., Richard, D. Cortisol response to the Trier Social Stress Test in obese and reduced obese individuals. Biol. Psychol. 84, 325-329 (2010).
- Wüst, S., Entringer, S., Federenko, I. S., Schlotz, W., Hellhammer, D. H. Birth weight is associated with salivary cortisol responses to psychosocial stress in adult life. Psychoneuroendocrinology. 30, 591-598 (2005).
- Simeon, D., Yehuda, R., Cunill, R., Knutelska, M., Putnam, F. W., Smith, L. M. Factors associated with resilience in healthy adults. Psychoneuroendocrinology. 32, 1149-1152 (2007).
- Quirin, M., Pruessner, J. C., Kuhl, J. HPA system regulation and adult attachment anxiety: Individual differences in reactive and awakening cortisol. Psychoneuroendocrinology. 33, 581-590 (2009).
- Pierrehumbert, B., Torrisi, R., Glatz, N., Dimitrova, N., Heinrichs, M., Halfon, O. The influence of attachment on perceived stress and cortisol response to acute stress in women sexually abused in childhood or adolescence. Psychoneuroendocrinology. 34, 924-938 (2009).
- Fiocco, A. J., Joober, R., Lupien, S. J. Education modulates cortisol reactivity to the Trier Social Stress Test in middle-aged adults. Psychoneuroendocrinology. 32, 1158-1163 (2007).
- Oswald, L. M., Zandi, P., Nestadt, G., Potash, J. B., Kalaydjian, A. E., Wand, G. S. Relationship between cortisol responses to stress and personality. Neuropsychopharmacology. 31, 1583-1591 (2006).
- Fries, E., Hellhammer, D. H., Hellhammer, J. Attenuation of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis responsivity to the Trier Social Stress Test by the benzodiazepine alprazolam. Psychoneuroendocrinology. 31, 1278-1288 (2006).
- Kudielka, B. M., Fischer, J. E., Metzenthin, P., Helfricht, S., Preckel, D., von Känel, R. No effect of 5-day treatment with acetylsalicylic acid (aspirin) or the beta-blocker propranolol (Inderal) on free cortisol responses to acute psychosocial stress: A randomized double-blind, placebo-controlled study. Neuropsychobiology. 56, 159-166 (2007).
- Gaab, J., Blättler, N., Menzl, T., Pabst, B., Stoyer, S., Ehlert, U. Randomized controlled evaluation of the effects of cognitive-behavioral stress management on cortisol responses to acute stress in healthy subjects. Psychoneuroendocrinology. 28, 767-779 (2003).
- Khalfa, S., Bella, S. D., Roy, M., Peretz, I., Lupien, S. J. Effects of relaxing music on salivary cortisol level after psychological stress. Ann. NY Acad. Sci. 999, 374-376 (2003).
- Balodis, I. M., Wynne-Edwards, K. E., Olmstead, M. C. The other side of the curve: Examining the relationship between pre-stressor physiological responses and stress reactivity. Psychoneuroendocrinology. 35, 1363-1373 (2010).
- Shultheiss, O. C., Stanton, S. J. Assessment of salivary hormones. Methods in Social Neuroscience. Harmon-Jones, E., Beer, J. S. , Guilford Press. New York. 17-44 (2009).
- Kudielka, B. M., Hellhammer, D. H., Wüst, S. Why do we respond so differently? Reviewing determinants of human salivary cortisol responses to challenge. Psychoneuroendocrinology. 34, 2-18 (2009).
- Buske-Kirschbaum, A., Jobst, S., Wustmans, A., Kirschbaum, C., Rauh, W., Hellhammer, D. Attenuated free cortisol response to psychosocial stress in children with atopic dermatitis. Psychosom. Med. 59, 419-426 (1997).
