هنا نقدم منخفضة التكلفة، ومتحمل البرد جهاز دائم لاسترجاع عينة من خزانات مليئة ديوار النيتروجين السائل. سهولة البناء وتصميم وحدات الجهاز يجعل من عملية استرجاع عينة من الدبابات المبردة آمنة وسهلة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
النيتروجين السائل هو عديم اللون، عديم الرائحة، بارد جدا (-196 درجة مئوية) السائلة أبقى تحت الضغط. ويشيع استخدام هذا كسائل المبردة لتخزين على المدى الطويل من مواد بيولوجية مثل خلايا الدم والأنسجة 1،2. طبيعة المبردة من النيتروجين السائل، في حين المثالي لحفظ عينة، يمكن أن يسبب التجميد السريع للأنسجة الحية في الاتصال - المعروفة باسم 'حرق المبردة "2، والذي قد يؤدي إلى قضمة الصقيع الشديد في الأشخاص الذين يشاركون عن كثب في تخزين واسترجاع عينات من Dewars. وبالإضافة إلى ذلك، والنيتروجين السائل يتبخر أنه يقلل من تركيز الأوكسجين في الهواء، وربما يسبب الاختناق، وخاصة في الأماكن الضيقة 2.
في المختبرات، وغالبا ما يتم تخزين العينات البيولوجية في cryovials أو cryoboxes مكدسة في الرفوف الفولاذ المقاوم للصدأ داخل الدبابات ديوار 1. وتقدم هذه رفوف التخزين مع رمح طويل لمنع مربعات من الانزلاق الخروج من الرفوف والى الجزء السفلي منDewars خلال التعامل مع الروتين. في كثير من الأحيان، ومع ذلك، وعلب أو قوارير مع العينات الثمينة تفلت وتنزل الى القاع من خزان النتروجين السائل شغلها. في مثل هذه الحالات، يمكن أن عينات استرجاع مضجر بعد نقل النيتروجين السائل في وعاء الغيار أو رميه. يمكن للصناديق وقارورة ثم تكون بأمان نسبيا تعافى من ديوار تفرغ. ومع ذلك، فإن طبيعة المبردة من النيتروجين السائل ومعدل توسع يجعل الغارقة الخطرة استرجاع العينة. ويوصى عادة من قبل مكاتب السلامة أن يتم أبدا تنفيذ استرجاع عينة من قبل شخص واحد. وثمة بديل آخر يتمثل في استخدام الأيادي بارد المتاحة تجاريا أو ملقط لسحب قوارير 3. ومع ذلك، الرؤية محدودة داخل Dewars سائل مظلم شغل يشكل عائقا كبيرا في استخدامها.
في هذه المقالة، ونحن تصف بناء جهاز متحمل البرد استرجاع DIY، الأمر الذي يجعل استرجاع عينة من السوائل المبردة ديوار التي تحتوي على كل من آمن 1الثانية وسهل.
البروتوكول
1. تجميع الأجهزة متحمل البرد لاسترجاع Cryoboxes
- باستخدام كماشة، تصويب جانب واحد من 3 جانب قوي التعادل (الشكل 1A) لتقديم مذكرة L قوي التعادل على شكل مبين في الشكل 1B: يمكن تحديد أبعاد تحالف قوي اعتمادا على قطر العنق من ديوار .
- 2 تأمين مثل هذه العلاقات القوية مع حزام تي قوي التعادل (الشكل 2) باستخدام التاج الترباس الجوز، غسالة والمسمار لتشكيل قاعدة Cryoscoop كما هو مبين في الشكل (3) (أ ب) ملاحظة: تستخدم اثني....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
إحدى الطرق الأكثر شيوعا لاسترداد cryoboxes وcryovials من قاع الخزان ديوار هو صب النتروجين السائل في وعاء الغيار وسحب العينات المتبقية في قارورة أو طافية في النيتروجين السائل يصب. هذا، مع ذلك، من الممارسات غير الآمنة التي يمكن أن تسبب حروقا المبردة أو الاختناق بسبب التعرض لفترات طويلة لأبخرة النيتروجين السائل 2. طريقة أخرى شائعة من استرجاع cryovials سقطوا ينطوي على استخدام ملقط cryovial 3. ومع ذلك، فإن الرؤية محدودة داخل فضاء مظلم من خزان مملوء النتروجين السائ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وقد تم اختبار الجهاز DIY استرجاع المبردة في سياق مشاريع "prenylation نمذجة البروتين البكتيري في الخلايا حقيقية النواة استخدام المعلوماتية الحيوية والنهج الجزيئي" التي ترعاها جائزة ماري لويز أندروز لبرنامج أبحاث السرطان، فرجينيا أكاديمية العلوم "، مما يعني الفسيولوجية لتحرير الحمض النووي الريبي في البلازما شجيري خلايا "برعاية Jeffress F. توماس وكيت ميلر Jeffress الثقة التذكارية وعقد 16.740.11.0364 الدولة (وزارة العلوم والتربية، وروسيا). نود أن نشكر بيت بعثة مراقبة الانتخابات للحصول على المساعدة مع تجربة سلامة الحمض النووي الريبي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| هيلمان المجموعة مشقوق شقة مطلي 1-3/8 × 4 أقدام، 14 المقياس | الأجهزة المحلية متجر | N / A | 1 وحدة مطلوبة |
| تاج بولت الفولاذ المقاوم للصدأ # 6 - 32 × 3/8 بوصة البيضاوي المسمار فيليبس رئيس حملة آلة | الأجهزة المحلية متجر | نموذج # 42281 | 4 وحدات مطلوب |
| تاج بولت 3/8 بوصة X 1-1/2 فيها الزنك مطلي غسالات الحاجز الصلب | الأجهزة المحلية متجر | نموذج # 20122 | 4 وحدات مطلوب |
| تاج بولت الزنك مطلي # 8-32 آلة البندق برغي | الأجهزة المحلية متجر | نموذج # 18512 | 4 وحدات مطلوب |
| سيمبسون قوي التعادل BC40Z 4 In.x4 فيها نصف قاعدة | الأجهزة المحليةتسوق | نموذج # BC40Z | 2 وحدة مطلوبة |
| سيمبسون قوي التعادل بعد 6 بوصات × 6 بوصات الشريط T | الأجهزة المحلية متجر | نموذج # 66T | 1 وحدة مطلوبة |
| أونيدا 6 مصفاة شبكة " | المحلية متجر بقالة | نموذج # 7859W | 1 وحدة مطلوبة |
| حفزت الفريق هيلمان المكسرات عرافة 3/8-16 | الأجهزة المحلية متجر | # نموذج: 810509 | 6 وحدات مطلوب |
| حفزت الفريق هيلمان الترابيس هيكس 3/8- 16 | الأجهزة المحلية متجر | 4 وحدات مطلوب | |
| رغوة للعزل | الأجهزة المحلية متجر | 1 وحدة مطلوبة | |
| برغي سائق | الأجهزة المحلية متجر | 1 وحدة مطلوبة | |
| كماشة | الأجهزة المحلية متجر | 1 وحدة مطلوبة |
المراجع
- Kittel, P. Advances in Cryogenic Engineering. , Springer. 41(1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , Plenum Press. New York. (1996).
- Council, N. R.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
