وهناك طريقة لالمتطايرة بسرعة شاشة محطة المضيفة عن طريق قياس الاستجابة الكهربية من orangeworm السرة الكبار ( Amyelois transitella) هوائيات لمكونات واحدة ويمزج عن طريق تحليل electroantennographic.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
Electroantennographic الأحيائي كأداة فحص لمواد متطايرة النبات المضيف
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المتطايرة مصنع تلعب دورا هاما في النبات والحشرات التفاعلات. الحشرات العاشبة استخدام المواد المتطايرة نبات، والمعروفة باسم kairomones، لتحديد موقع مصنع المضيفة. 1،2 عند محطة المضيف مهم للتغذية السلع الزراعية ضرر الآفات الحشرية التي يمكن أن تسبب خسائر اقتصادية جسيمة للمزارعين. وفقا لذلك، يمكن استخدام kairomones كما جاذبة لإغراء أو الخلط بين هذه الحشرات، وبالتالي تقديم بديل صديقة للبيئة للمبيدات لمكافحة الحشرات. 3 لسوء الحظ، والنباتات يمكن أن تنبعث من المواد المتطايرة مع عدد كبير تركيبة مختلفة ونسب من الانبعاثات تعتمد على الفينولوجيا للسلعة أو الوقت من اليوم. هذا ما يجعل تحديد المكونات النشطة بيولوجيا، أو مزيج من المكونات المتطايرة عملية شاقة. للمساعدة في تحديد المكونات النشطة بيولوجيا من انبعاثات محطات المضيف المتقلبة التي نتبعها في مختبر فحص الأحيائي القائم على electroantennography (EAG). EAG هو أداة فعالة لتقييم وrecorد electrophysiologically ردود حاسة الشم من حشرة عبر مستقبلاتها antennal. لا يمكن للعملية الفرز EAG يساعد على التقليل من عدد من المواد المتطايرة اختبار لتحديد المكونات النشطة بيولوجيا واعدة. ومع ذلك، اختبارات بيولوجية EAG سوى تقديم المعلومات حول تنشيط المستقبلات. فإنه لا يوفر معلومات حول نوع من سلوك الحشرة مجمع مثير لل، التي يمكن أن تكون بمثابة نوع، جاذبة طارد أو غيرها من استجابة سلوكية. وتؤخذ عادة المتطايرة حصول على استجابة كبيرة من قبل EAG، نسبي للسيطرة على الإيجابية المناسبة، إلى مزيد من التجارب من الاستجابات السلوكية للآفات الحشرية. تصميم تجريبي سوف تعرض بالتفصيل المنهجية المتبعة لفحص اللوز المستندة إلى المواد المتطايرة النبات العائل 4،5 بواسطة قياس ردود antennal الكهربية من شخص بالغ للآفات الحشرية orangeworm السرة (Amyelois transitella) لمكونات واحدة ويمزج بسيط من المكونات عبر EAG الأحيائي. ويستخدم الأسلوب 2 السابقينوضعت هوائيات cised عبر صاحب "شوكة" قطب كهربائي. بروتوكول تظاهر هنا يعرض السريع، والإنتاجية العالية لطريقة موحدة لفحص المواد المتطايرة. كل متقلب هو على المبلغ، ومجموعة ثابتة كما لتوحيد مستوى التحفيز، وبالتالي السماح للردود antennal أن تكون مؤشرا على chemoreceptivity نسبي. سيطرة سلبية تساعد على القضاء على الاستجابة الكهربية لكلا القوة المتبقية المذيبات والميكانيكية للنفخة. السيطرة الايجابية (في هذه اسيتوفينون سبيل المثال) هو مركب واحد التي كانت دافعا لاستجابة متسقة من الذكور والإناث فراشة السرة (الآن) orangeworm. معيار semiochemical الإضافية التي توفر استجابة متسقة ويستخدم للدراسات الأحيائي مع فراشة NOW الذكور (Z، Z) -11،13-hexdecadienal، مكونا الألدهيد من فرمون الإناث المنتجة. 6-8
البروتوكول
1. إعداد مواد متطايرة كشفه من النبات المضيف لفحص EAG
- بعد تحديد المناسبة والمصادقة على جميع المواد المتطايرة عبر GC-MS، نفذ تحليل EAG نفخة من كل متقلبة المتاحة. يمكن أن يكون الفحص الأولي لعدد تكرار منخفض من الردود antennal (N = 3-5) لكل من الجنسين من أجل تحقيق مؤشرا chemoreceptivity نسبي في فترة قصيرة من الزمن (الجدول 1).
- يعد حل من كل تقلب في تركيز ملغ / 5 مل في البنتان. اغلاق محكم وبردت العينة حتى جاهزة للاستخدام الفوري (على سبيل المثال، اسيتوفينون، كثافة = 1،03 جم / مل، ح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
استخدام التسجيلات electroantennogram باعتباره الأحيائي لتحديد استجابات استقبال كيميائي من حشرة الهدف هو شائع الى حد كبير ويمكن العثور على العديد من الدراسات التي تستخدم EAG كما كشف عن النفايات السائلة من الغاز اللوني (GC-EAD) في الأدب. أظهرت 9،10 الأسلوب وسوف توفر التشخيص السريع لكميات يعادل المكونات المتطايرة مع مكررات عالية لتخصيص واثق من الاستجابة النسبية. برنامج AutoSpike في البرنامج Syntech هو برنامج جيد لفحص المواد المتطايرة لأنها قادرة على توفير سعة انحراف أقصى إ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلف لديه البحوث التعاونية القائمة والتوصل إلى اتفاق مع شركة تنمية الزراعة باراماونت، وهي شركة لها علاقات LLC Suterra.
شكر وتقدير
وأجري هذا البحث في إطار مشروع CRIS USDA-ARS 5325-42000-037-00D ومع النتائج من CRADA 58-3K95-7-1198 و TFCA 58-5325-8-419. المؤلفين الامتنان Suterra عن هدية من (Z، Z) -11،13-hexadecadienal، B. Higbee لمناقشات مثمرة، وجيه بيكر لتقديم المساعدة التقنية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| اسيتوفينون | ألفا، Aesar | A12727 | إيجابي سيطرة الإناث |
| (Z، Z) -11،13-Hexadecadienal | Suterra | إيجابي سيطرة الذكور | |
| α-Humulene | الدريتش | 53675 | Sesquiterpene |
| 2-Undecanone | الدريتش | U1303 | الأحماض الدهنية المشتقة |
| 2-فينيل | الدريتش | 77861 | مركب بنزيني |
| البنتان | EMD | PX0167-1 | مذيب |
| 4-قناة اكتساب تحكم | Syntech | أناDAC-4 | |
| EAG التحقيق، قبل مكبر للصوت | Syntech | نوع PRG-2 | |
| هوائي حامل | Syntech | لPRG-2 | شوكة كهربائي |
| التحفيز تحكم | Syntech | CS-55 | تدفق الهواء ونفث |
| أطياف الكهربائي جل | باركر | 12-02 | |
| الأحيائي أقراص | Whatman | 2017-006 | 6 ملم |
| باستور pipets | VWR | 14673-010 | 5 ¾ "(14.6 سم) |
| Parafilm M | بيميس | PM-992 |
المراجع
- Bruce, T. J. A., Wadhams, L. J., Woodcock, C. M. Insect host location: a volatile situation. Trends in Plant Sci. 10, 1360-1385 (2005).
- Unsicker, S. B., Kunert, G., Gershenzon, J. Protective perfumes: the role of vegetative volatiles in plant defense against herbiv....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
