אנחנו מדגימים את פרוטוקול שבו ממשל של azoxymethane הסוכן genotoxic (AOM) ואחרי שלושה מחזורים של נתרן פרו דלקתי סוכן dextran סולפט (DSS) במהירות ובעקביות יוצר גידולים במעי גס בעכברים עם דמיון מורפולוגיים ומולקולרי לאלו שנראו בקוליטיס האנושי -קשור לסרטן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנשים עם מחלת מעי דלקתית (IBD), כגון מחלת קרוהן (CD) או קוליטיס (UC) נמצאים בסיכון מוגבר להתפתחות סרטן המעי גס (CRC) על אנשים בריאים. סיכון זה הוא פרופורציונלי לזמן וההיקף של מחלה, עם שכיחות מצטברת גבוה כמו 30% אצל אנשים עם UC ארוך שנים עם מעורבות נרחבת של מעי גסה. דיספלזיה חוקן 1 במחלת מעי דלקתי וקוליטיס המשויך הסרטן (CAC) הם האמינו להתפתח כתוצאה מחזורים חוזרים ונשנים של פגיעה בתאי אפיתל ותיקון בזמן שהתאים האלה שוחים בסביבת ציטוקינים דלקתית כרונית. 2 למרות שסרטן המעי גס וספונטני הקשורים לשתף את האיכות להיות אדנוקרצינומה, רצף של אירועים מולקולריים שבבסיס הוא ככל הנראה שונה. 3 זה הבחנה טוענת צורך במודלים של בעלי חיים ספציפיים של CAC.
כמה מודלי עכבר קיימים כיום ללימוד CAC. Dextran סולפט Sodiאממ (DSS), סוכן עם השפעות רעילות ישירות על אפיתל של המעי הגס, יכול להינתן במי שתייה לעכברים במחזורים מרובים כדי ליצור מצב דלקתי כרוני. עם משך מספיק, חלק מעכברים אלו יפתחו גידולים. 4 התפתחות גידול היא מהרה במודל זה אם מנוהל באווירה פרו מסרטנת. אלה כוללים עכברים עם מוטציה גנטית במסלולי tumorigenesis (APC, p53, MSH2), כמו גם עכברים שטופלו מראש-עם סוכני genotoxic (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]). 5
שילוב של DSS עם AOM כמודל לסרטן משויך קוליטיס צבר פופולרי לשחזור שלו, העצמה, המחיר נמוך, וקלות השימוש. למרות שיש להם מנגנון משותף, AOM כבר מצא להיות יותר חזק ויציב בתמיסה מDMH. בעוד התפתחות גידול בדגמים אחרים דורשת בדרך כלל מספר חודשים, עכברים שהוזרקו עם AOM, ולאחר מכן טופלו בDSS לפתח גידולים בהולמיםיכולים להינתן כקטן של 7-10 שבועות. 6, 7 לבסוף, AOM וDSS לעכברים מכל רקע גנטי (knock out, מהונדס, וכו ') ללא הכלאות למתח סרטני מסוים. הנה, אנחנו מדגימים את הפרוטוקול לtumorigenesis מעי דלקתי מונע בעכברי ניצול זריקה אחת של AOM אחרי שלושה מחזורים של שבעה ימים של DSS לאורך תקופת שבוע 10. מודל זה גורם לגידולים בשינויים ההיסטולוגיים ומולקולריים דומים מאוד לאלה המתרחשים בCAC האנושי ומספק מודל יקר מאוד ללימוד oncogenesis ומניעה כימית במחלה זו. 8
פרוטוקול
1. אינדוקצית סרטן המעי גס הקשורים
- מניחים בצד כלובים של מין וגיל 6-8 עכבריו מותאמים בשבוע ישנים שישמש לקבוצות ניסוי ובקרה. עכברים יכולים להיות מתויג באופן אישי, עם סימון זנב או קליפים אוזן.
- ביום 0, משקולות בסיסיות תקליטים ולהזריק כל intraperitoneally עכבר (IP) עם 10 מ"ג / ק"ג של פתרון עובד AOM (1 מ"ג / מ"ל בסליין איזוטוני, דילול מפתרון מניית מ"ל 10 מ"ג / בdH2O החזיקו ב -20 מעלות C) . בהתבסס על ניסיון, מינון זה יכול להיות מותאם בין 7-14 מ"ג / ק"ג ו / או חזר בתחילת הניסוי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
טיפול בעכברים עם AOM וDSS מהירות וביעילות מודלי סרטן בבני אדם הקשורים לדלקת מעי גס. השערות לגבי גורמים תורשתיים לסרטן המעי גס הקשורים ניתן ללמוד בקלות בעכברים מהונדסים גנטי. 13, 16 לחלופין, ההשפעה של מטרות תרופתיות בסרטן המעי גס הקשורים ניתן ללמוד על ידי העסקת עכברי סוג פראי.
בעוד מודל זה הוא מוערך מאוד על ידי מי שמתעניייין במחקר של התפתחות גידול במעי בהגדרה של דלקת, מגבלות קיימות. היקף המחלה נצפה בעכב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
עבודה זו מומנה בחלקו על ידי DK089016 וL30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS), וP30-DK52574 (לCore אוניברסיטת וושינגטון עיכול מחלות המחקר). AIT היה עמית הווארד יוז רפואי במכון למחקר רפואי הדרכה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם המגיב | חברה | מספר קטלוגים | תגובות |
| עכברי C57BL/6J | ג'קסון מעבדה | 000664 | |
| Azoxymethane (AOM) | סיגמה אולדריץ | A5486-100 מ"ג | פתרון המלאי: לדלל עד 10 מ"ג / מ"ל במים מזוקקים כדי להיות כל זמן ב -20 ° C כמו 0.5-1 aliquots מ"ל. פתרון עובד: לדלל מניות ל1 מ"ג / מ"ל באיזוטוני (0.9%) המלוח |
| נתרן סולפט dextran (DSS) | ייעוץ TdB | DB001 | MW 40 kDa (36-50 הכנות KDA ממקורות אחרים הם מקובלים; אותו המגרש שישמש לניסוי בודד) 6 |
| Coloviewמערכת miniendoscopic | קרל Storz | מרובה | ראה בקר et al. להסבר מפורט של ציוד והתקנה. 11 |
| TPP ראפיד FILTERMAX 500 בקבוק-מסנן מ"ל, 0.22 מיקרומטר PES | מערב תיכון מדעי | TP99500 | כל מסנן תרבית רקמה הסטנדרטית מקובל |
| אתיל אלכוהול 200 ההוכחה ASC / USP | Pharmaco-AAPER (או אחר) | 11ACS200 | לדלל עד 70% במים מזוקקים |
| , USP isoflurane | אספקת לבריאות בעלי החיים באטלר | 4029405 | עכבר מקום בצנצנת זכוכית עם גזה או מטלית קטנה טבולה בחומר ההרדמה |
| 18G מחט Gavage סטרייט | בריינטרי מדעי | N-008 | |
| נאגר מלוח פוספט (PBS) | סיגמאאולדריץ | P5493 | מדולל ל1X (0.01 M) במים מזוקקים |
| מגש קר (פלייט הרקמות Tek השני הקר) | הפישר סיינטיפיק | NC9491941 | חנות ב -20 ° C |
| ImageJ תוכנה | NIH (להורדה בחינם) | http://rsbweb.nih.gov/ij/ | |
| פורמלדהיד (37%) | הפישר סיינטיפיק | F79-500 | לדלל עד 10% בPBS |
| אגר BD Bacto | הפישר סיינטיפיק | DF0140-01-0 | השתמש בפלטה חשמלית כדי ליצור פתרון 2% במים מזוקקים |
| מלקחי הלבשת Eye Miltex | MedPlus בע"מ | 18-780 | |
| מספרי Eye Miltex | MedPlus בע"מ | 18-1430 | נקודות מעוגלות למנוע ניזק למעי גס במהלך פתיחה. |
| Alcian הכחול 8GX (אבקה) | סיגמה אולדריץ | A5268 | הוסף אבקת 1 גרם לחומצת 100 מ"ל 3% אצטית (חומצה אצטית קרחונית 3 מ"ל + 97 מיליליטר מים מזוקקים) |
| מזרק 1 מ"ל טוברקולין עם 26 המצורפים G x 3/8 במחט פוע intradermal | BD | 305946 | להזרקה של AOM |
מקורות
- Ekbom, A. Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study. N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).
- Terzic, J. Inflammation and colon cancer. Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).
- Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
