Модификация клеточных мембран красных кровяных телец (эритроцитов) с сверхразветвленных полиглицерина (HPG) представлены. Измененные эритроциты были характерны водной двухфазной разделов, осмотическая хрупкость и дополнения опосредованный лизис. Камуфляж поверхностных белков и антигенов оценивали с помощью проточной цитометрии и Micro System Typing (МТС) карты крови фенотипа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Антигены охраняемых Функциональные эритроциты Мембрана прививки Компактный сверхразветвленных полиглицерины
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Красные клетки крови (эритроциты) переливание имеет жизненно важное значение для лечения ряда острых и хронических медицинских проблем, таких как талассемия и серповидно-клеточная анемия 1-3. В связи с наличием множества антигенов на поверхности эритроцитов (~ 308 известными антигенами 4), пациентов в хронической терапии переливания крови развиваются аллоантител в связи с матчем мисс незначительных антигенов на переливание эритроцитов 4, 5. Прививка гидрофильные полимеры, такие как полиэтилен гликоля (PEG) и сверхразветвленных полиглицерина (HPG) образует исключения слой на мембране эритроцитов, что препятствует взаимодействию антител с поверхностными антигенами, не влияя на прохождение малых молекул, таких как кислород, глюкоза и ионы 3. В настоящее время ни один метод не доступен для генерации универсальных красных клеток крови донора отчасти из-за сложной проблемы, связанной с наличием большого количества антигенов (белков и углеводов основе) на поверхности эритроцитов и DРАЗВИТИЯ таких методов позволит существенно повысить безопасность переливания, а также значительно улучшить доступность и использование БС. В этом докладе, эксперименты, которые используются для разработки антигена эритроцитов охраняемой функциональной мембраной прививки HPG и их характеристика представлены. HPGs высоко биосовместимые полимеры компактная 6, 7, и ожидается, что находится внутри клетки гликокаликса, которая окружает липидную мембрану 8, 9 и маски РБК поверхностных антигенов 10, 11.
Протокол
А. сверхразветвленных Модификация полиглицеридов (SS-HPG)
- Место лиофилизированный HPG 60 кДа (0,5 г, 0,0083 ммоль) в колбу с круглым дном и просушить в течение ночи под вакуумом при 90 ° C.
- Охладите колбу до комнатной температуры, и распустить сушеные HPG в безводном пиридине (3 мл).
- Для функционализации примерно восемь гидроксильных групп на HPG с карбоксильными группами, добавить каталитическое количество диметиламинопиридина (одна капля 5 мг / мл раствора в пиридине) к HPG решение. К этой смеси добавляют янтарный ангидрид, (0,0067 г, 0,0664 ммоль) растворяли в 0,5 мл пиридина по каплям в течение 10 мин. Смесь перемешивают в течение н....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Камуфляж резус-D антигена CD47 и РБК поверхности белка количественно с помощью проточной цитометрии с использованием флуоресцентных меченых моноклональных антител, а также представитель результат приведен на рисунке 1. В случае HPG-привитые эритроцитов (серый), интенсивность сигнала уменьшилась (пик смещается налево) по сравнению с контрольной эритроциты (красные и зеленые) указывает на снижение в связывании антител к клеточной поверхности, которые свидетельствуют о маскировке поверхностных белков .
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Универсальный эритроциты донора имеют большой потенциал в повышении доступности и безопасности крови для переливания крови терапии. Эритроциты также считают перспективным для доставки лекарств транспортных средств в связи с их долгого обращения и присущие биосовместимость 14, 15. Эксперименты, представленные в настоящем документе оценки в пробирке характеристики HPG изменения эритроцитов. В свойствах пробирке и в естественных обращения HPG измененные эритроциты были исследо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Это исследование было профинансировано канадский Услуги крови (КОС) и канадского Института Здоровья наук (CIHR) Фонда Партнерство исследований. Авторы благодарят LMB макромолекулы концентратор на UBC Центр исследований крови для использования их научно-исследовательских учреждений. Инфраструктуры при поддержке Канады основа для инноваций (CFI) и Майкл Смит Фонд исследований в области здравоохранения (MSFHR). Р. Chapanian является получателем (CIHR / CBS) докторской стипендии в переливании науки и получателем MSFHR исследований стажером сообщение докторских стипендий. JN Kizhakkedathu является получателем MSFHR Карьера премии Академии следователь.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Глицидол | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| Триметилолпропана | Fluka | (ON, Канада) | |
| Калий метилата | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| Безводный пиридин | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| 4-диметиламинопиридин | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| Ангидрида янтарной кислоты | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| Ацетон | Fisher Scientific | (ON, Канада) | |
| Безводный диметилформамид | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| N-гидроксисукцинимида | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| N, N-диизопропилкарбодиимид | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| МТС карт | Micro Typing System (МТС) карты (Флорида, США) | ||
| Декстран 500 кДа | Pharmacia Fine Chemicals | (Швеция) | |
| PEG 8 кДа | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| FITC моноклональными анти-резус-D (RHD) | Фактор Biodiagnostics | (Пенсильвания, США) | |
| PE моноклональных анти-CD47 | BD Biosciences | (Нью-Джерси, США) | |
| Драбкин Реактив | Sigma Aldrich | (ON, Канада) | |
| Таблица. Химических веществ и реагентов, используемых для прививки HPG полимеров мембраны эритроцитов и их анализ. |
Ссылки
- Bradley, A. J., Murad, K. L., Regan, K. L., Scott, M. D. Biophysical consequences of linker chemistry and polymer size on stealth erythrocytes: size does matter. Biochim. Biophys. Acta. 1561 (2), 147-158 (2002).
- Murad, K. T., Mahany, K. L., Brugnara, C., Kuypers, F. A., Eaton, J. W., Scott, M. D.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
