Method Article

معطفا البذور الفراش الفحص لاستكشاف وراثيا في المختبر كيف إنبات البذور في الضوابط السويداء نبات الأرابيدوبسيس thaliana

DOI:

10.3791/50732

⸱

November 9th, 2013

 , 
1Département de Botanique et de Biologie Végétale, Université de Genève

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم الإجراء لتجميع البذور الفراش معطف مقايسة (SCBA) من بذور نبات الأرابيدوبسيس thaliana. وقد أظهرت SCBA أن تكون أداة قوية لاستكشاف وراثيا في المختبر وكيفية إنبات البذور الضوابط السويداء في البذور نائمة واستجابة لمنبهات الضوء. وSCBA هو من حيث المبدأ المعمول بها تحت أي الحالة التي يشتبه السويداء على التأثير في النمو الجنيني.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتكون السويداء نبات الأرابيدوبسيس من طبقة وحيدة الخلية المحيطة الجنين ناضجة ويلعب دورا أساسيا لمنع إنبات البذور نائمة أو أن البذور nondormant المشع من قبل الحمراء بعيدة (FR) نبض الضوء. من أجل مزيد من التبصر في الآليات الوراثية الجزيئية الكامنة وراء النشاط القمعية الإنبات بواسطة السويداء المبذولة، وقد وضعت "البذور الفراش معطف" مقايسة (SCBA). وSCBA هو إجراء تشريح فصل جسديا معاطف البذور والأجنة من البذور، والتي تسمح بمراقبة نمو الأجنة على طبقة الأساسية من المعاطف البذور. بشكل ملحوظ، وSCBA reconstitutes الأنشطة القمعية إنبات البذور معطف في سياق سكون البذور والسيطرة FR-تعتمد على إنبات البذور. منذ SCBA يسمح باستخدام اندماجي من سبات، وnondormant المعدلة وراثيا معطف البذور والمواد الجنينية، مسارات الجينية السيطرة على الإنبات وتحديدا المرجعيمكن تشريح بتوليد في السويداء والجنين. نحن هنا التفاصيل الإجراء لتجميع SCBA.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في نبات الأرابيدوبسيس البذور الناضجة، ويتكون غلاف البذرة من تيستا، وهي الطبقة الخارجية من النسيج الميت من أصل الأمهات، والسويداء، وطبقة وحيدة الخلية من الأنسجة الحية التي تحيط مباشرة الجنين 1. وتستمد السويداء والجنين من الأحداث الإخصاب منفصلين: السويداء هو نسيج ثلاثي الصيغة الصبغية مع اثنين من الأم والأب واحد الجينوم في حين أن الجنين هو نسيج مضاعفا مع الأمهات واحدة واحدة الجينوم الأب 2.

وتتمثل المهمة الرئيسية المسندة تقليديا إلى السويداء هو أن الأنسجة الغذائية. ومع ذلك، أصبح من الواضح بشكل متزايد أن السويداء أيضا يلعب دورا مركزيا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرة واحدة يتم تجميعها في SCBA، ويتم رصد نمو الأجنة على مدى عدة أيام. لذلك، قبل إجراء تشريح البذور والتجمع من SCBA، ويحتاج المرء لتعقيم البذور لتجنب التلوث المستقبلية التي يمكن أن تحول دون التقييم السليم لتأثير المواد معطف البذور على النمو الجنيني.

1. تعقيم البذور

  1. صب 50-60 ميكرولتر من البذور نبات الأرابيدوبسيس ناضجة وجافة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل وإعداد محلول الإيثانول 70٪.
  2. إضافة 1 مل من الايثانول 70٪ الحل ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأظهرت الأعمال السابقة أن بذور متحولة غير قادر على تجميع GA كانوا غير قادرين على الإنبات نتيجة لتراكم عالية ABA في البذور 11،12. ومع ذلك، وعدم القدرة على الإنبات يتطلب معطف البذور منذ زواله يؤدي النمو الجنيني 13. هذا وأشارت بقوة إلى أن السويداء من البذور غير قادر على تجميع GA هو الافراج ABA لمنع النمو الجنيني. وبالتالي فإننا نتوقع البذور المعاطف غير قادر على تجميع GA لمنع نمو الأجنة في SCBA عكس المعاطف البذور غير قادر على تجميع وGA ABA. نحن هنا استخدام GA.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البذور الفراش معطف مقايسة (SCBA) الإجراء الموضح هنا هو من حيث المبدأ ينطبق على أي ظرف من الظروف حيث يتم حظر إنبات البذور نبات الأرابيدوبسيس (أو تأخر) والتي يشتبه السويداء لتنفيذ هذا الاعتقال. هذا الأخير يمكن أن يتضح من إزالة غلاف البذرة (تيستا والسويداء) وملاحظا أن عائدات النمو الجنيني أسرع بالنسبة لتلك التي لوحظت عند محاصرون الأجنة عن طريق غلاف البذرة. قد يتم حظر إنبات ردا على وجه الخصوص المعلمات المادية البيئية (مثل الماء أو المحتملة ونوعية الضوء) أو في خلفيات .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية ودولة جنيف.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Thermomixer ComfortEppendorf AG5355 000.011Eppendorf AG ، هامبورغ ، ألمانيا
Vacusafe ComfortINTEGRA Biosciences AG158 310Integra Biosciences AG ، Zizers ، سويسرا
طبق أطباق بتري (100 مم × 20 مم)Greiner Bio-One GmbH664 102Greiner Bio-One GmbH ، Frickenhausen ، ألمانيا
Murashige و SkoogSigma-AldrichM5524سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية
MESSigma-AldrichM3671Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية
أجار (أجار النبات)Duchefa Biochemie B.V.P1001Duchefa Biochemie ، هارلم ، هولندا
ملقط دومون # 5Fine Science Tools GmbH11251-10Fine Science Tools GmbH ، هايدلبرغ ألمانيا
إبرة حقنةBD Micro-Fine324827BD ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي الولايات المتحدة
الأمريكية شبكة نايلون (SEFAR NYTEX) SEFARAG03-50 / 31Sefar AG ، هايدن ، سويسرا
غرفة النموCLF مناخ النباتPercival I-30BLLXCLF Plant Climatics ، Wertingen ، ألمانيا
PaclobutrazolSigma-Aldrich46046Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Debeaujon, I., Leon-Kloosterziel, K. M., Koornneef, M. Influence of the testa on seed dormancy, germination, and longevity in Arabidopsis. Plant Physiol. 122, 403-414 (2000).
  2. Baroux, C., Spillane, C., Grossniklaus, U. Evolutionary origins of the endosperm in flowering plant....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Seed Coat Bedding AssayEndosperm ControlSeed GerminationArabidopsis thalianaEmbryo DissectionGermination MediumGA Deficient MutantsSeed Coat IsolationCircular Layer AssemblyContinuous Light Incubation

Related Articles