Melkverzameling van diermodellen vergemakkelijkt verschillende onderzoekswegen: het begrijpen van passieve immuniteit, het identificeren van pathogenen die verantwoordelijk zijn voor verticale overdracht en, door het gebruik van transgene muizen, zelfs de commerciële productie van eiwitten die in menselijke moedermelk worden aangetroffen. Hier illustreren we een eenvoudige methode voor melkverzameling bij muizen en Reeves’ muntjakherten.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves 'Muntjac Herten
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Diermodellen worden vaak gebruikt in onderzoekslaboratoria om te bereiken wat normaal gesproken als onpraktisch zou worden beschouwd in de natuurlijke gastheer van een pathogeen. Melkverzameling van dieren biedt wetenschappers de mogelijkheid om veel aspecten van reproductie te bestuderen, waaronder verticale transmissie, passieve immuniteit, biologie van de borstklier en lactatie. Het verkrijgen van voldoende hoeveelheden melk voor deze studies is een uitdagende taak, vooral bij kleine diermodellen. Hier illustreren we een goedkope en eenvoudige methode voor melkverzameling bij muizen en Reeves' muntjakherten die geen gespecialiseerde apparatuur of uitgebreide training vereist. Deze specifieke methode vereist twee onderzoekers: één om de melk uit te drukken en het dier te stabiliseren, en één om de melk te verzamelen in een geschikte container van een Muntjac of muismodel. Het muismodel vereist ook het gebruik van een P-200 pipetman en bijbehorende pipettentips. Hoewel deze methode kostenefficiënt en relatief eenvoudig uit te voeren is, moeten onderzoekers erop worden gewezen dat anesthesie van het dier vereist is voor een optimale melkverzameling.
Inleiding
Diermodellen inzicht in pathologie die niet kunnen worden verkregen door in vitro analyse. De meest effectieve resultaten oplevert, is het belangrijk om een diermodel dat nauw samenhangt met de ziekte en soorten van gebruik. Bijvoorbeeld, de Reeves 'muntjak (wordt reevesi), een kleine Aziatische hert 1,2 en transgene muizen die de cervid prion eiwit (CerTgPrP) 3 zijn nuttig diermodellen voor soorten hertachtigen. Beide soorten zijn polyestrous, waardoor het hele jaar door fokken, en dus een consistente bron voor zwangerschap-gerelateerde weefsels en vloeistoffen aan specifieke mechanismen bestuderen in hertachtigen biolog....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Mouse Milking Protocol
De in dit protocol beschreven methoden werden goedgekeurd door IACUC.
1. Scheiding van de Dam van Offspring
- Selecteer de dam om gemolken te worden. Kies een dam met een nestje van 4 of meer pups die 8-12 dagen na het werpen te zorgen maximale ophalen van melk-hoewel collectie is mogelijk op elk tijdstip na de bevalling tot 21 dagen.
- Scheid de dam uit haar nest minstens 2 uur voor het melken.
Opmerking: Indien een verlangen om meer dan een dam melk in een bepaalde periode, is het acceptabel om de gescheiden dammen in dezelfde kooi met voldoende voedsel en water....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Muis
Uit onze experimenten hebben we vastgesteld dat het mogelijk is om ongeveer 100-400 pl melk ve laboratoriummuis, afhankelijk van verschillende variabelen verzamelen. Deze variabelen zijn 1) het bedrag van de tijd gereserveerd voor het verzamelen, 2) de dosis oxytocine toegediend, 3) hoeveel pups de dam is momenteel verpleging en 4) de hoeveelheid tijd na de bevalling. Onze studies hebben aangetoond dat de hoogste opbrengst wordt verkregen wanneer de dammen gescheiden va.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Muis
Er zijn verschillende factoren om rekening te houden bij het verzamelen van melk van een muis, waaronder 1) het bedrag van de tijd gereserveerd voor het verzamelen, 2) de dosis oxytocine toegediend, 3) hoeveel pups de dam is momenteel verpleging en 4) het bedrag van de tijd die is verstreken sinds de bevalling op het moment van de collectie. Met behulp van eerdere studies als leidraad hebben we besloten om de voorwaarden voor de melkgift te optimaliseren.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Deze experimenten werden gefinancierd door de NIH-subsidie #RAI093634A. We willen onze grote dank betuigen aan Jenny Powers, DVM, PhD, voor haar hulp bij het melken van muntjaks.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Materialen—Muis | |||
| Ketamine (KetaVed 100 mg/ml) (dosis: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dosis: 5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Oogvocht | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocine (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materialen—Muntjak | |||
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | Optioneel: de onderzoeker kan ofwel Midazolam alleen of de BAM-combinatie als verdoving gebruiken |
| Butorphanol tartraat (Torbugesic) (0,45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartraat (0,25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0,07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dosis: 0,25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocine (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Apparatuur—Muis | |||
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μl pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml spuiten | MWI | 005427 | |
| 27 G naalden | MWI | 002031 | |
| Apparatuur—Muntjak | |||
| 15 ml conische buisjes | VWR | 21008-918 | |
| 22 G naalden | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock spuiten | MWI | 001377 |
Referenties
- Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
- Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
